剖析活性维生素D3对UUO 模型大鼠肾间质的影响.docVIP

剖析活性维生素D3对UUO 模型大鼠肾间质的影响 　　肾间质纤维化(RIF)是由各种细胞、细胞因子和炎症递质相互作用导致以胶原蛋白为主的细胞外基质在肾间质异常积聚，最终导致肾小管萎缩，肾间质纤维化。肾间质纤维化与化学因子、钙盐沉积、代谢性酸中毒等多种因素有关。OPN是一种重要细胞外基质结构组分，是吸引肾间质巨噬细胞最重要的趋化因子，其表达量与间质炎症和纤维化程度密切相关。目前OPN在RIF中的研究较少，探讨如何阻断OPN在肾脏的表达，对于肾间质纤维化的治疗具有重要意义。TGF-beta;1广泛分布于不同类型的细胞组织中，被认为是最重要的致纤维化因子之一。TGF-beta;1能够促进ECM成分如胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ的合成，促进蛋白多糖的合成;TGF-beta;1还可通过诱导成纤维细胞生长因子的表达，使肾脏成纤维细胞合成增多，导致肾间质纤维化。活性维生素D3即1，25-二羟维生素D3[1，25-(OH)2D3]，其经典作用是参与体内钙磷代谢调节。近年研究发现，活性维生素D3能够减轻肾小管间质纤维和纤维化，延缓肾功能减退等作用。本实验通过UUO模型模拟肾间质纤维化过程，并给予活性维生素D3干预治疗，观察OPN、TGF-beta;1在肾脏的表达、分布，探讨其在肾间质纤维化中的作用。同时观察活性维生素D3在肾间质纤维化中的作用，为肾间质纤维化的早期诊断、临床治疗探寻新的方法。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物 　　模型的建立及分组36只Wistar雄性大鼠体重180～220g，随机分为3组，活性维生素D3治疗组(n=12)、UUO模型组(n=12)、假手术组(n=12)。将UUO模型组大鼠以及活性维生素D3治疗组大鼠称重，水合氯醛6mL/kg腹腔注射麻醉。将大鼠仰卧位且四肢固定于清洁手术台，备皮消毒后行腹中线左侧切口，沿左侧肾脏下极用眼科镊游离左侧肾脏及输尿管，于输尿管上1/3处手术缝线上下结扎两处。术后将肾脏逐层缝合。假手术组分离输尿管不做结扎，手术过程与其它两组相同。活性维生素D3治疗组给予活性维生素D33ng/100g每日灌胃一次，假手术组和UUO模型组给予每日一次0.1mL生理盐水灌胃至实验结束。各组大鼠分别各取6只于结扎术后第14、28天眦静脉取血1～2mL测定Scr和BUN。然后处死大鼠，迅速取出左侧肾脏，10%中性福尔马林固定液固定，48h后石蜡包埋，将肾组织切成切片。 　　1.2肾功能检测 　　佳木斯大学附属第一医院生化室检测血肌酐、血尿素氮。 　　1.3肾脏的病理学 　　检查及免疫组化染色石蜡包埋的肾组织做2mu;m连续切片进行HE、Masson染色。应用Image-ProPlus图像分析系统对Masson染色照片进行分析。先在低倍镜下每只动物的切片随机取20个视野，取视野的中央，在200倍镜下留取图像。计算每个视野下蓝染区域占总视野面积的百分比，取均值。OPN、TGF-beta;1表达:随机选取15个高倍镜视野(times;400)，用高清晰度彩色病理图文报告分析系统进行分析，分析每个视野下棕黄色累积光密度值，计算均值。肾组织OPN、TGF-beta;1免疫组织化学染色采用SABC法，DAB棕黄色反应呈阳性，通过光学显微镜放大400倍摄取图像。 　　1.4统计学方法 　　采用SPSS16.0分析软件，多组间比较采用单因素方差分析，Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1梗阻侧肾脏组织大体观察假手术组大鼠肾脏组织红润，大小正常。UUO组和活性维生素D3治疗组梗阻侧肾脏肾实质变薄，肾盂肾盏高度扩张，体积明显增大，可见肾内积水。 　　2.2各组大鼠血肌酐、血尿素氮测定各时间点血肌酐、血尿素氮水平在假手术组、UUO组活性维生素D3治疗组之间差异无显著性(Pgt;0.05)。 　　2.3各组大鼠肾脏病理检查HE染色镜检结果:假手术组各时间点大鼠肾脏肾小球均无明显病理改变。肾小管排列紧密，小管周围肾间质无增宽;肾小球、小管结构正常。活性维生素D3治疗组和UUO模型组早期可见肾间质炎症细胞局灶浸润，肾小管扩张不明显.术后第14天，光镜下可见多数小管扩张、灶性萎缩，肾小管上皮细胞弥漫性肿胀、空泡变性，肾小球病理改变不明显。肾小管结构紊乱、变形，肾间质增宽。术后28d，间质纤维化程度加深，小管周围肾间质有散在或多灶性单核、淋巴细胞浸润增多，肾间质明显增宽。活性维生素D3治疗组与UUO模型组相比，同时间点肾小管间质病变程度减轻，肾间质纤维化相对面积也明显减少。活性维生素D3治疗组在术后第14天、28天炎症细胞浸润，肾间质增宽。Masson染色镜检结果:UUO模型组术后14d肾间质增宽、小管上皮细胞弥漫性肿胀，