分析正交试验优化硫酸长春新碱脂质体的制备工艺.docVIP

分析正交试验优化硫酸长春新碱脂质体的制备工艺 　　长春碱类药物是以夹竹桃科植物长春花Catharanthus roseus (Linn.) G. Don 的全草为原料，经提取分离，再经化学合成制得。长春新碱难溶于水，因此在临床上以硫酸盐的形式给药，即硫酸长春新碱。迄今为止，该类药物仍被认为是具有显著疗效的主要抗肿瘤药物之一。必威体育精装版临床实践还证实，硫酸长春新碱在治疗系统性红斑狼疮合并血小板减少性紫癜时可取得理想效果。目前，临床给药的主要剂型为硫酸长春新碱注射剂，然而累积剂量、超剂量应用、误行鞘内注射等因素都会给患者带来严重的神经毒性反应，这在很大程度上限制了硫酸长春新碱应用于肿瘤的治疗。脂质体具有增强药物靶向性、提高疗效、延长半衰期、降低毒性等优点，并且脂质体的膜成分还具有生物可降解性和生物相容性等优点。因此将脂质体作为抗癌类药物载体在癌症的治疗中已经显示明显的优越性。将硫酸长春新碱制成脂质体，可延长药物循环时间，增加药物在病灶部位的浓度和作用时间，提高疗效，降低毒性。 　　目前在国外主要有 3 家公司进行硫酸长春新碱脂质体的研发[8]。美国食品药品监督管理局(FDA)于 2012 年 8 月 9 日批准 Talon Therapeutics 公司和Tekmira 公司联合研究的硫酸长春新碱脂质体注射剂用于费城染色体阴性成人急性淋巴细胞白血病的治疗。因此，在国内硫酸长春新碱脂质体的研发意义重大，但该项目的技术难度高，主要是如何筛选出包封足够稳定的脂质体处方，从而解决硫酸长春新碱极易从脂质体渗漏的问题。磷脂是脂质体的重要组成部分。磷脂的种类和比例不同都会对脂质体的物理和化学性质产生影响，进而影响药物疗效。研究发现，硫酸长春新碱脂质体的性质主要受到磷脂的种类、饱和度、分子链的长度、电荷等因素的影响。通常表现为：饱和磷脂相对于不饱和磷脂，饱和程度高的磷脂相对于饱和程度低的磷脂制备的硫酸长春新碱脂质体有更好的药物保留性质和体内循环时间;由结构稳定的磷脂制备的脂质体比较稳定，药物的保留性质优越。 　　然而，目前国内文献报道的硫酸长春新碱脂质体制备多采用性质相对不稳定的磷脂材料，如氢化大豆卵磷脂、大豆卵磷脂。因此，本实验应用性质单一稳定的饱和磷脂SPC-3 和 DSPC 分别为磷脂材料，以包封率为指标，对硫酸长春新碱脂质体制备过程中空白脂质体载药的处方工艺影响因素进行考察与优化，为后期的研发工作奠定实验基础。 　　1 材料 　　R-215 型旋转蒸发仪(瑞士 Buchi 仪器有限公司)，JEM100CXII 型透射电子显微镜(日本电子公司)，FE20 精密 pH计(瑞士 Mettler-Toledo 仪器公司)，Zetasizer Nano ZS90电位粒度分析仪(英国马尔文仪器有限公司)，AS 10200BT超声波清洗机(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)，Liposofast LF50 挤出仪(加拿大 Avestine 公司)，聚碳酸酯滤膜(美国Whatman 公司)，NS1001L 高压匀质机(意大利 GEA Niro Soavi 公司)，FJ200-S 数显高速分散均质机(上海标本模型厂)，透析袋(截留相对分子质量为12 000～14 000，美国生产) 硫酸长春新碱原料药(质量分数 99.5%，批广州汉方现代中药研究开发有限公司)，氢化大豆磷脂酰胆碱(Lipoid SPC-3，静脉注射用，质量分数 98%，德国 Lipoid 公司)，二硬脂酰磷脂酰胆碱(Lipoid PC 18∶0/18∶0，即 DSPC，静脉注射用，质量分数 99%，德国 Lipoid 公司)，胆固醇(质量分数 99.2%，批号南京新百科药业有限公司)，Triton-X 100(天津光复精细化工研究所)，葡聚糖凝胶 SephadexG-50(美国 Pharmacia公司)。 　　2 方法与结果 　　2.1 包封率的测定 　　2.1.1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(200 mmtimes;4.6 mm，5 mu;m)，流动相甲醇ndash;水ndash;三乙胺(70∶30∶0.5，用磷酸调 pH 7.0)，检测波长 297 nm，柱温 40 ℃，体积流量 1.2 mL/min，进样量 20 mu;L。 　　2.1.2 对照品溶液的制备 取 1.00 g/L 硫酸长春新碱储备液 0.5 mL，置 250 mL 量瓶内，加入 10%的Triton-X 100 溶液 1.0 mL，去离子水定容，得 2 mg/L硫酸长春新碱对照品溶液。 　　2.1.3 供试品溶液的制备 取 0.15 mL 硫酸长春新碱脂质体，置 10 mL 量瓶，加水适量，混匀