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关于金黄凝胶对大鼠急性软组织损伤的治疗
关于金黄凝胶对大鼠急性软组织损伤的治疗
金黄凝胶源于金黄散膏,是苏州市中医院骨伤科的协定处方,由天花粉、生赤芍、生大黄、白芷、黄柏5 味中药组成,具有化瘀消肿、排脓止血之功效,主要用于软组织损伤、骨折早期及骨性关节炎等病症,临床应用多年,疗效显著。散膏是一种传统外用剂型,药材以粗粉入药,对有效成分的释放有一定的影响。金黄凝胶为金黄散膏的改进剂型,采用现代化的提取及制备工艺制备凝胶剂型。因此本研究考察金黄凝胶对大鼠急性软组织损伤的治疗作用,为其临床应用提供实验依据。
1 实验材料
1.1 仪器
MP12001 电子天平,上海市恒平科学仪器有限公司;CP-800 科德士宠物电推剪,科德士公司;YLS-3E 电子压痛仪,山东省医学科学院设备站;52A 医用低速离心机,安心县白洋离心机厂;DK-8B恒温水浴锅,上海精宏实验设备有限公司;BS224S电子天平,北京赛多利斯仪器系统有限公司;M2e型酶标仪,Molecular Devices 公司;
1.2 药品及试剂
金黄凝胶,每克凝胶相当于生药0.11、0.23、0.46 g ,江苏康缘药业股份有限公司, 批凝胶基质,江苏康缘药业股份有限公司,批金黄散膏,江苏康缘药业股份有限公司,批青鹏软膏,西藏奇正藏药股份有限公司,规格15 g∶20 g,批号1311450421、1308240232;双氯芬酸钠凝胶,先声药业有限公司,规格15 g∶0.15 g,批号35-140516;甲醛,上海中试化工总公司,批水合氯醛,成都市科龙化工试剂厂,批生理盐水,常州亚邦制药有限公司,批大鼠白细胞介素-1beta;(IL-1beta;)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)检测试剂盒,Enzo Life Science 公司,批93695029一氧化氮(NO)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批
1.3 动物
清洁级 SD 大鼠,130 只,雄性,体质量180~220 g,上海杰思捷实验动物有限公司提供,生产许可证号SCXK(沪)2012-0006,质量合格证号2010002600953。大鼠饲养于屏障级级动物房,饲以实验鼠用颗粒饲料,由江宁青龙山动物繁殖场提供。动物均自由进食饮水,人工照明(12 h 光照/12 h 黑暗),温度和湿度分别保持在20~25 ℃和50%~70%。动物接收后于实验室环境下适应性饲养3 d后方可用于正式实验。
2 实验方法
2.1 分组
随机选取 10 只大鼠作为对照组,将其余大鼠随机分为模型组、双氯芬酸钠凝胶组、青鹏软膏组、金黄散膏组以及金黄凝胶小、中、大剂量组,每组15 只。用电动剃毛器剃去大鼠左后肢小腿后群肌部位毛发。
2.2 造模
造模方法参考文献报道并加以改进。ip 10%的水合氯醛3 mL/kg 麻醉,麻醉生效后,俯卧位固定于鼠板上,并用纱布垫将左后肢垫起,以防止其悬空。将左后肢稍外旋,500 g 砝码从30 cm 塑料管顶部垂直自由下落,在小腿后群肌部位打击5 次,造成大鼠急性软组织损伤。如果发生骨折,则剔除。对照组只麻醉及剃毛,不造模。
2.3 给药
造模后 24 h 开始给药,各组分别以各受试药物均匀涂抹大鼠左后肢砸伤部位,给药面积约6 cm2。对照组和模型组大鼠每只涂抹基质0.3 g,双氯芬酸钠凝胶组涂抹0.010 g/只,青鹏软膏组0.300 g /只,金黄凝胶组0.033、0.069、0.138 g,金黄散膏组0.069 g。1 次/d,连续给药5 d。
2.4 检测指标
2.4.1 肿胀度的测定观察造模前以及造模后第1、3、5 天给药30 min 后各组大鼠左后肢小腿中部外侧砸伤部位肿胀程度。使用皮尺测定左后肢小腿中部外侧砸伤部位周长,计算肿胀度。肿胀度=测定周长-基础周长
2.4.2 压痛阈值的测定分别用压痛仪测定造模前以及造模后第1、3、5 天各组大鼠左后肢造模部位痛阈值。
2.4.3 损伤指数的测定记录造模后第1、3、5 天给药前各组损伤指数。损伤指数评分标准为:皮下瘀血:多量、块状计2 分,少量、点状计1 分,无瘀血者计0 分。肌肉肿胀:明显肿胀计2 分,稍有肿胀计1 分,无肿胀者计0 分。肌肉颜色:紫暗色深计2 分,暗红色浅计1 分,色泽正常计0 分。
2.4.4 血清炎性因子的测定于末次给药后每组随即选取10 只大
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