精浆的生化检验技术三修__培训课件.pptVIP

* 检测意义 结构：丝氨酸蛋白溶解酶，属于膜结合性酶 功能：水解卵细胞的透明带及卵黄膜以达成一条通道，便于精-卵结合完成受精过程 顶体酶活性可反映精子质量，是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标 　四、精子顶体酶活力的测定 * 试验原理 BAPNA 　　硝酰基苯胺 BAPNA:Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺（410nm) 试剂 抑制剂　　　　　　缓冲剂 终止液　　　　　　底物液 精氨酸酰胺酶 * 操作方法 标本准备 以清洁塑料容器盛精液标本，液化标本室温可置3h，勿冷冻保存 按每管参加反应的精子数为7.5×106个，根据标本精子浓度(M×106/ml)，计算实验所需精液量v ml（计算方法：v=7.5/M） 试剂准备 反应液临用前配制底物﹢缓冲液﹦1﹕4 * 操作方法 　　测定管 　　对照管 　抑制剂（ ul ） 　　100 　　　100 各反应管加盖，以手指轻弹管底使沉淀精子均匀悬浮 　反应液（ ul ） 　　1000 　　　1000 　终止液（ ul ） 　　　100 　　　　　　　　　24℃准确孵育1h 　终止液（ ul ） 　　100 　　　　　　　　　2000g离心15min 0.5cm比色皿，410nm波长比色蒸馏水调零读取OD值 * 结果计算 单位定义 在24℃，水解1.0∪molBAPNA／min的 　底物量定义为1IU顶体酶活性 计算 顶体酶活性(μIU/106精子) ＝　　　　　　　　　　　　　×106 正常参考值 48.2~218.7 μIU/106精子 495 ×7.5 （测定管OD值— 空白管OD值）× 2 * 检测意义　 升高　前列腺肥大或早期前列腺癌 降低　前列腺炎 试验原理 对硝基酚磷酸盐　　　　　　对硝基酚　　　黄色化合物，其显色程度于405nm波长与标本酸性磷酸酶浓度成正比 五 、精浆酸性磷酸酶的检测 精浆酸性磷酸酶 加　酸 加　碱 * 标本准备 记录受检者一次射精的精液总量(ml)。精液液化后不超过30分钟，以3000g离心10分钟，保留精浆 若样本不能立即测定，于Eppendorf管中加50ul精浆和50ul ACP保存液，充分混匀。 将精浆标本稀释5000倍 * 比色及计算 ACP国际单位（IU）：1单位酸性磷酸酶=37℃下每分钟产生1umol PNP 标本系数=总孵育体积÷样本体积÷反应时间(min)×精浆稀释倍数 标准管浓度对应的标本浓度值(U/ml) =标准管实际浓度×18500÷1000×1/1.11 =标准管实际浓度×16.667 * 各标准管计算结果如下 3200 192 800 48 200 12 0 0 输入酶标仪程序时标准管浓度 （U/ml） 标准管实际浓度（umol/L） * 报告方式 标本最终检测结果以“精浆ACP总活性”方式报告，即总活性=标本浓度(U/ml)×一次射精的精液体积(ml) =U/一次射精 参考值范围 ≥200 U/一次射精（WHO） 暂定中国人正常参考值：≥500 U/一次射精 * 　　六、精浆柠檬酸的测定 正常人精浆柠檬酸含量＞10mg/一次射精 功能： 通过与钙的结合而调节精浆中钙离子的浓度，并影响射精后精液的液化功能 参入维持精浆渗透压 对精子活动及透明质酸酶的活性也起重要作用 其含量与睾酮水平相关，可以帮助判断雄激素的分泌状况及评价前列腺的功能 * 　　七、精浆LDH-x测定 LDH-x为精子在生殖道内运动提供充足能源。睾丸萎缩患者LDH-x相应降低或消失，精子发生缺陷时则无LDH-x的生成，精液检查正常者也可因LDH-x活性下降而引起不育 测定精液LDH并结合激素水平测定可作为评价生精上皮状态指标，严重少精症者，精液LDH-x明显升高，提示病人精子发育正常，而不育患者精子计数正常精液LDH-x活性低下，则提示精子分化受到损害或抑制 * LDH-x也是评价精液质量的可靠指标 试验证实，男性不育患者精浆中LDH活性大于正常男性，精子LDH-x活性小于正常男性，表明在考虑男性不育时，精子膜的完整程度及其损坏原因也需要引起足够重视。 参考值： 精浆1270-2190u/L 精子2310-3960u/L * 八、精浆核蛋白组型转换 睾丸精子发生过程中，精原细胞和精母细胞内的核蛋白主要为体细胞的组蛋白，富含赖氨酸，但到了精子细胞阶段，则组蛋白逐渐被鱼精蛋白取代 鱼精蛋白的功能 中和DNA电荷并能抑制RNA的合成，抑制基因的表达 在受精前精子基因在鱼精蛋白的特殊保护下紧密浓集，无任何转录作用，无疑有重要的生理意义 * 核蛋白组型转换缺陷或异常可引起男性不育 　　或胚胎早期夭折流产 使精子DNA不稳定，易受损而不受孕 一旦受精，由于核蛋白的组型异常，精子 　核不能正常解