神經生物学实验指导.docVIP

实验9-3 脊髓背根与腹根的机能 目的要求 学习暴露脊髓和分离脊神经背腹根的方法。了解背根和腹根的不同机能。 基本原理 脊神经的背根是由传入神经纤维组成，具有传入机能；腹根由传出神经纤维组成，具有传出机能。若切断背根，则相应部位的刺激不能传入中枢；若切断腹根，不能传出冲动，则其所支配的效应器也不再发生反应。 动物与器材 蟾蜍或蛙、常用手术器械、金冠剪、弯头金冠剪、刺激器或多用仪、小型弯头露丝电极、蛙板蛙腿夹、滴管、棉花、红色和白色细丝线、任氏液。 方法与步骤将蟾蜍或蛙毁脑后腹位固定于蛙板上。沿背部中线剪开皮肤，向前开口至耳后腺水平，向后开口至尾杆骨中段。用剪刀小心剪去脊椎两侧的纵行肌肉及椎间肌肉，暴露椎骨。 用金冠剪横向剪断环椎，然后将弯头金冠剪小心伸入椎管，自前至后逐节剪断两侧椎弓（图9-3），移去骨片，暴露全部脊髓（勿损伤脊髓）。 用眼科镊轻轻挑开脊髓表面的银灰色或黑色脊膜，再用任氏液冲洗马尾部，小心识别第7~10对脊神经背根和腹根（图9-4）。用玻璃分针分离一侧第9对脊神经的背、腹根（背根近椎间孔处有淡黄色、半个小米粒大小的脊神经节），将背根穿两条白色丝线，腹根穿两条红色丝线备用。放松两后肢即可进行实验观察。 （1）提起白丝线，轻轻用刺激电极钩起背根，打开刺激器，用较弱的单脉冲刺激背根(只引起同侧后肢抖动)，记录结果。 （2）用同样的方法刺激腹根，记录结果。 （3）将两条白线双结扎背根后从中间剪断神经，分别刺激其中枢端和外周端（刺激强度不变），记录结果。 （4）用同样的方法结扎并剪断腹根，重复刺激背根中枢端，记录结果。 （5）分别刺激腹根中枢端和外周端，记录结果。 思考题根据实验结果，说明背根和腹根的机能。 实验9-4 损伤小白鼠一侧小脑的效应 目的要求 一侧小脑损伤后的动物，躯体运动表现异常，通过对异常运动的观察，了解小脑的运动机能。 基本原理 小脑具有维持身体平衡，调节肌紧张和协调肌肉运动等机能。当小脑损伤后，随着破坏程度的不同，可表现出不同程度的肌紧张失调平衡失调。 动物与器材 小白鼠常用手术器械、大头针、麻醉口罩、乙醚、棉花。 方法与步骤 1.用乙醚麻醉小白鼠（注意仔细观察呼吸，若呼吸变慢时则表示动物已麻醉）。 2.自头顶部至耳后沿正中线剪开皮肤，将颈肌向下剥离。透过透明的颅骨即可看清小脑的位置（图9-5），用大头针刺穿颅骨，直达小脑（2-3mm），搅毁该侧小脑（注意不可深刺，一面损毁脑干）。 3.待小鼠清醒后，可见其向一侧旋转或翻滚。如损伤较轻，小白鼠向健侧旋转；当损伤重时，则向损伤侧翻滚。 4.将实验用完的小白鼠拉断颈椎处死后弃之。 思考题根据实验结果说明小脑的生理机能。 创新与探索 设计实验，观察毁其他小动物一侧小脑的效应。2.1.2甲醛溶液致炎大鼠疼痛行为的观察 疼痛时一种不愉快的主观感受，也是临床常见的病理生理现象。疼痛机制的研究需要以动物模型为研究对象。在众多的疼痛模型中，甲醛模型致炎模型，因其具有高度的有效性和可靠性，且与临床常见的慢性疼痛相似的特点，因而被广泛应用于疼痛机制和镇痛效果的研究。本实验通过大鼠一足底注射甲醛溶液致炎，观察大鼠的疼痛行为反应。 目的 1）了解制作甲醛溶解疼痛模型的基本方法。 2）掌握疼痛行为的观察指标及疼痛分数的计算方法。仪器与试剂1）仪器：特制实验笼，用透明有机玻璃制成，体积30cm×30cm×30cm,其下装一面与地面成450角的镜子以利观察。 2)试剂:5%甲醛溶液(用无菌生理盐水配制)。 步骤1）成年Wistar大鼠两只，性别不限，体重200~250g,实验前放入实验笼内适应30min，禁食水。随机分布成实验组和对照组。 2）实验组：用1ml的标准注射器将5%甲醛溶液50ul迅速注入大鼠任一足底皮下。 3）对照组：任一足底皮下注射0.9%生理盐水50ul. 4）注射后，立即将大鼠放回实验笼内，观察并记录各种行为反应持续时间。每5分钟为一个时间段，共计50min,10个时间段。所用行为指示：A. 双足着地，体重均匀分配；B。注射足轻着地；C。抬起注射足；D.添咬注射足。 5）计算各时间段的疼痛分数（S）。 6）S=B+2C+3D/N. 7)根据疼痛程度依次将A、B、C、D四种行为表现，分别评为0.1、2、3分。B、C、D分别表示5min记录到的各行为反应的持续时间（s）,N表示时间段。 8）以疼痛分数为纵坐标，时间为横坐标做疼痛分数曲线图（图2-1-2）。 思考题 与对照组比，甲醛溶液注射组疼痛分数如何变化？ 实验组的疼痛分数曲线有何特点？ （利 梅 李菁锦参考文献 利梅，李菁锦，吕国蔚.2000.PKC抑制剂抑制大鼠一足福尔马林致炎痛的迟反应. 中国疼痛医学杂志. 6（4