硝酸甘油偏头痛模型对大脑即早基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用.docVIP

硝酸甘油偏头痛模型对大脑即早基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用 　　[摘要] 目的 探讨硝酸甘油偏头痛模型对脑即早基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用。 方法 健康Wistar大鼠30只，随机分为对照组、偏头痛模型组、治疗组，各组均灌胃给予盐酸氟桂利嗪或等量生理盐水，每日1次，连续7 d，末次给药20 min后，皮下注射生理盐水或硝酸甘油复制实验性偏头痛大鼠模型，于3 h后取材。随机选取大鼠脑片5个视野，进行c-fos 和 c-jun阳性细胞计数，分析每张切片上每个视野的平均灰度。 结果 偏头痛模型组脑组织切片c-fos 和 c-jun阳性细胞数[（30.60±3.78）、（26.50±6.56）]较对照组[（9.10±1.66）、（8.02±2.05）]明显增多（P 0.01），盐酸氟桂利嗪治疗组c-fos 和 c-jun阳性细胞数[（13.40±3.45）、（14.30±2.88）]较模型组显著减少（P 0.05）；偏头痛模型组脑组织切片c-fos 和 c-jun阳性细胞灰度[（104.50±13.73）、（84.34±16.92）]较对照组 [（157.05±37.16）、（177.65±34.36）] 显著减弱（P 0.01）；盐酸氟桂利嗪治疗组c-fos 和 c-jun阳性细胞灰度[（129.18±37.2）、（151.44±43.29）]较模型组明显增强 （P 0.05）。 结论 硝酸甘油偏头痛动物模型可显著提高c-fos 和 c-jun阳性细胞数，减弱c-fos和c-jun阳性细胞灰度，而盐酸氟桂利嗪可抑制实验性偏头痛动物模型脑内c-fos 和 c-jun的阳性表达，增强c-fos和c-jun阳性细胞灰度。 　　[关键词] 硝酸甘油；偏头痛；即早基因；氟桂利嗪 　　[中图分类号] R747.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（c）-0032-03 　　偏头痛是一类复杂的神经血管性疾病，与遗传基因和环境因素均有关。偏头痛日益成为影响人们日常生活和工作的重要因素。大量研究显示，偏头痛的发病机制与即早基因的过度表达有关。即早基因是细胞接受刺激后短时间内表达的一族基因，是原癌基因的一类。基因组中的正常基因，进行表达时称原癌基因，原癌基因的正常表达产物是跨膜信号转导过程所必需的。原癌基因被第二信使介导的相关过程激活后，数分钟内即可表达，称即早基因，包括c-fos、c-jun及c-myc等，其中c-fos、c-jun是研究中枢神经系统的重要基因。c-fos基因在正常情况下参与细胞的生长、分化、信息传递、学习和记忆等过程[1-2]，c-fos、c-jun基因蛋白可以早期表达脑缺血、癫痫等刺激引起的分子状态下的神经损伤[3-4]。c-fos、c-jun基因蛋白表达可用于评价偏头痛引起的细胞代谢变化及药物的干预作用。本文旨在观察硝酸甘油偏头痛模型对大脑即刻基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用，为偏头痛的治疗优化筛选提供可靠的 依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　成年Wistar大鼠60只，体重（250±20）g，购自山东大学医学院动物实验中心。 　　1.2 药品与试剂 　　10%水合氯醛（鲁药准字产品批号；盐酸氟桂利嗪胶囊（西安杨森制药有限公司，批准文号：国药准字 产品批号：121119973）；0.9%氯化钠注射液（规格250 mL，山东金洋药业有限公司，国药准字产品批号：1295412）。兔抗c-fos、c-jun抗体（北京中杉生物有限公司）；DAB显色液（京博奥森生物工程有限公司）；光学显微镜（德国leica DM4000B）；leica Qwin V3图像分析软件（德国）。 　　1.3 实验方法 　　将Wistar大鼠30只，雌雄各半，随机分为对照组、偏头痛模型组、治疗组，每组10只。对照组和偏头痛模型组各灌胃给予生理盐水20 mL/mg；治疗组灌胃给予盐酸氟桂利嗪1.25 mg/kg，每日1次，连续7 d；第15天灌胃20 min后，除对照组皮下注射生理盐水外[5]，其余各组于右肩部皮下注射硝酸甘油（10 mg/kg）复制实验性偏头痛大鼠模型[6]，于建模后3 h取材。 　　腹腔注射10%水合氯醛（0.06 mL/kg）麻醉大鼠，暴露心脏，穿刺左心室，插管入升主动脉，剪开右心耳，以250 mL生理盐水快速灌注至肝脏变白，以含4%多聚甲醛的PBS（0.1 mol/L，pH 7.4）灌注固定，0.5 h后取出全脑，置入含4%多聚甲醛0.1 mol/L的PBS（pH 7.4，4℃）后固定；8 h后放置于含20%蔗糖的磷酸缓冲液中，待脑组织下沉，进