中医不同治法对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症相关细胞因子的影响.docVIP

中医不同治法对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症相关细胞因子的影响 　　摘要：目的 观察中医不同治法对高脂血症心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠炎症相关细胞因子含量的影响，探讨其对MI/RI的拮抗作用。方法 60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。除假手术组外，其余大鼠予高脂饲料喂养，采用可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制MI/RI模型，检测再灌注后各组大鼠血清总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）以及细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10含量。结果 与模型组比较，各治疗组血清CHO、TG、HDL-C、LDL-C含量降低（P0.05）。结论 活血化瘀法及痰瘀同治法对大鼠MI/RI有显著保护作用，其机理可能与调控血脂、抑制炎症因子表达，从而减轻炎症反应有关。 　　中图分类号：R242.2；R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0040-03 　　关键词：心肌缺血再灌注损伤；祛痰宽胸；活血化瘀；痰瘀同治；炎症反应；大鼠 　　结构破坏，引起细胞死亡，导致梗死范围扩大，造成心功能的进一步损害。随着动脉搭桥术、溶栓术等疗法的应用和推广， MI/RI已成为当今急性心肌缺血再灌注治疗时代不能实现心肌“有效再灌注”的一个主要原因和障碍。MI/RI病因复杂，与多种因素有关，其中炎症反应与再灌注损伤关系密切[1-2]。近年研究表明，中药能通过抑制炎症细胞的趋化与浸润，调节细胞因子的合成与分泌，减轻炎症损伤，发挥心肌保护作用[3]。本研究采用高脂大鼠制备MI/RI模型，从炎症反应角度探讨祛痰宽胸、活血化瘀、痰瘀同治等不同中医治法对MI/RI的拮抗作用，以期为临床治疗缺血性心脏病提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　雄性SD大鼠60只，体质量（315±20）g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2012-0001。 　　1.2 主要试剂与药物 　　总胆固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒均购自北京中生北控生物科技有限公司，批号分别为120621、120931、120502、120521；细胞间黏附分子（ICAM）-1、肿瘤坏死因-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10 ELISA试剂盒，英国Abcam公司产品，购自北京中原领先科技有限公司，批号分别为GR101667-1、k120727、GR95720-1。 　　祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法代表方剂分别选用瓜蒌薤白半夏汤（瓜蒌24 g，薤白9 g，清半夏12 g，白酒24 L）、血府逐瘀汤（当归9 g，生地黄9 g，桃仁12 g，红花9 g，枳壳6 g，赤芍6 g，柴胡3 g，桔梗5 g，川芎5 g，牛膝9 g，甘草3 g）及痰瘀同治方（前两方合方）。三方分别浓缩成含原药材量1.3、2.2、2.15 g/mL的水煎液，中药材购自亳州市芳益堂药业有限责任公司。药物剂量换算按体质量70 kg成人每日1剂用量换算出大鼠1日用量（相当于人用剂量的20倍）。 　　1.3 分组 　　将60只大鼠随机分5组，每组12只，分别为假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。假手术组动物常规饲养，其余各组给予高脂饲料（74%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和15%猪油，购自北京科澳协力饲料有限公司）。 　　1.4 造模与给药 　　各组分别按1 mL/100 g量给予生理盐水或药物灌胃，每日1次，连续给药8周。末次给药2 h后用于实验。 　　取材前，腹腔注射1%戊巴比妥钠（5 mL/kg），麻醉后仰卧位固定四肢及头部。记录Ⅱ导心电图。颈部、胸前手术野备皮，切开气管，连接动物呼吸机（呼吸频率70次/min，吸呼比1∶2，潮气量9 mL/kg）。自左侧第3～4肋间剪开皮肤，钝性分离肌肉组织，打开胸腔，剪开心包膜，于左心耳与肺动脉圆锥之间找出冠状动脉左前降支，并以5-0号丝线结扎分支起点外约1～2 mm，（在丝线与心肌间放一根约1 cm长细棉绳），此时缺血心肌壁呈现发绀、膨出，同时记录心电图，以标准肢导联Ⅱ导联ST段弓背上抬、T波高耸，显示心肌缺血形成。30 min后松开结扎，使缺血冠脉再灌注，关闭胸腔，再灌注120 min，心电图示ST段回落1/2以上。结扎前心电图不正常，或未到观察终点而死亡以及造模不成功者剔除。 　　1.5 标本采集与检测 　　实验结束后，腹主动脉取血5 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清，全自动生化仪