第四章肠道菌群的要点分析.pptVIP

大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管。 全部为0，报告为 ＜最低检出线 如样品中大肠菌群较少，可加大接种量，采取双料发酵管 CFU 通过数据直接求数学期望 根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 将凉至46℃结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA平板）注入平皿约15～20mL，并转动平皿，混合均匀。同时将1mL稀释液（不含样品）作空白对照。 待琼脂凝固后，倒入3～4mL VRBA培养基铺面，培养基凝固后翻转平板，置36±1℃温箱内培养18～24h。 选取菌落数在15～150之间的平板，分别计数典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径约为0.5mm。 ?从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36?℃±1?℃培养24?h～48?h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。?? ??经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。 例：10-4样品稀释液1?mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105?CFU/g（mL）。 定义：一群能在44.5℃,24-48h内发酵乳糖,产酸产气的需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 检测意义：粪大肠菌群的来源是人和温血动物粪便，作为粪便污染的指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。比大肠菌群更加直接。 细菌域(Bacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、肠杆菌目(Enterobacteriales)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、埃希氏菌属(Escherichia)、大肠杆菌种(E. coli) 。 它是一种普通的原核生物，是人类和大多数温血动物肠道中的正常茵群。但也有某些血清型的大肠杆菌可引起不同症状的腹泻，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。 定义：广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气，IMViC（靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐）生化试验为＋＋－－或－＋－－的革兰氏阴性杆菌。以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。 IMViC生化试验：细菌的生化反应吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）四种试验常用于鉴定肠道杆菌，合称为IMViC试验。用于鉴别形态、革兰染色反应和培养特性相同或相似的细菌。 G-短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。兼性厌氧菌。 能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。 正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。 EMB是一种弱选择性培养基，一些球菌也可在该培养基上生长； 大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽； 该培养基受可见光易使其中的成分氧化，储存及培养细菌时都应在避光条件。 菌名 菌落形态 大肠埃希氏菌 紫黑色，有绿色金属光泽 肺炎克雷伯氏菌 粉色，中心色深 阴沟肠杆菌 粉色，中心色深 弗氏志贺氏菌 无色 鼠伤寒沙门氏菌 无色 粪链球菌 无色 选取2个～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL稀释液加入无菌平皿做空白对照。 将10mL～15mL冷至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mL结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮）（VRBA-MUG）覆盖平板表层。凝固后翻转平板，36℃±1℃培养18 h～24 h。 选择菌落数在10CFU～100CFU之间的平板，暗室中360 nm～366 nm 波长紫外灯照射下，计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。 检验时用已知MUG阳性菌株（如大肠埃希氏菌ATCC 25