BMMSCs生物学性能及其和脊髓修复材料的生物作用.pdf

中文摘要 本文以大鼠骨髓间充质干细胞为细胞基础，对脊髓损伤修复支架材料 IKVAV接枝聚乳酸／聚7_,--醇水凝胶进行初步的细胞学研究，通过细胞和材料的 共培养进行细胞增殖、细胞周期、细胞毒性和细胞粘附性等实验，对材料的细 胞相容性进行评价。主要研究结果如下： 全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞，通过频繁换液以及控制 消化时间对细胞进行纯化培养，细胞从第三代开始呈现比较均一的细胞形态， 说明细胞纯度得到了提高；进行细胞生长曲线绘制、细胞周期测定、克隆形成 集落实验以及诱导成骨成脂实验对BMMSCs的生物学性能进行初步探讨。实验 结果表明，分离培养出来的细胞形态比较均一、纯度较高、增殖能力旺盛以及 具有多向分化潜能，是骨髓间充质干细胞。 在五种浓度(2mM，1mM，0．5mM，0．1 mM和0．02mM)IKVAV多肽预 包被的培养板中培养BMMSCs，24h的粘附率试验结果表明：浓度为O．1mM的 多肽浓度最适合细胞的粘附；五种浓度多肽对细胞的增殖影响实验结果显示： O．1mM多肽组OD值大于其它组，对细胞增殖的促进作用较为明显，对细胞活 力影响显著；流式细胞仪对五种浓度多肽作用下细胞周期检测的结果显示：0．1 mM多肽组细胞的S期的比例为32．29％，增殖情况强于其它组。上述实验结果 表明：IKVAV多肽在不同程度上可以促进细胞更快的贴壁和增殖。 倒置显微镜下观察水凝胶材料与BMMSCs的三维培养情况，发现细胞在接 枝IKVAV水凝胶中均匀的生长，形态多呈长梭形铺展开；细胞在未接枝IKVAV 的水凝胶中细胞较为稀疏，形态多为圆形，粘附性不是很好。场发射扫描电镜 观察发现细胞能很好的粘附于接枝IKVAV的水凝胶材料表面以及凝胶孔洞中， 而几乎没有细胞粘附在未接枝多肽的水凝胶上。说明接枝IKVAV多肽的水凝胶 具有较好的生物活性，适合用于脊髓修复的支架材料。 关键词：骨髓间充质干细胞；诱导分化；克隆形成集落；细胞周期；接枝水凝 胶 ABSTRACT Inthis evaluationof Cord paper,the cytology preliminary Spinal Injury(SCi) scaffold IKVAVlacticacid repair materials(grafted poly polyethyleneglycol made basedonthecellfoundationofrotbonemallOW hydrogel)was mesenchymal stem andcelladhesion CelIs(BMMSCs)．Cellproliferation,celltoxicity cycle，cell weredone theco—cultureofcelland to assays through materialsof thecells explore ofSCI scaffold compatibility materials．，nlemainresearchresultsaleas repair follows： ．nlefull bonemarrowadherencemethodWas