肾上腺髓质素促卵巢癌细胞迁移作用机制研析.pdf

·中文论著摘要· 肾上腺髓质素促卵巢癌细胞迁移及作用机制的研究 介绍 卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤，发病率在女性常见恶性肿瘤中排名第六位， 致死率在女性恶性肿瘤中排名第五位。卵巢癌作为一种高侵袭性的妇科肿瘤，由 于出现症状时大多为晚期，盆腹腔广泛转移病灶，实施理想的减瘤术有一定的困 难，其五年生存率仅在25．30％。所以研究卵巢癌侵袭转移机制的意义重大。 993年自人肾 肾上腺髓质素(AdrenomedullinAM)是由日本学者Kitattra等于1 上腺髓质嗜铬细胞瘤中发现的多肽类，因其在肾上腺髓质中的含量高，故被称为 肾上腺髓质素。AM在体内分布广泛，有多种生物学效应，可作为循环激素、旁分 泌激素及自分泌激素参与体内多种生理、病理过程，在肿瘤发生发展中起到重要 的作用。 有研究表明，在卵巢癌组织及细胞系中有AM的受体——降钙素受体样受体 bFGF的刺激下自分泌AM，促进肿瘤细胞增殖。这些均证明了AM可能在卵巢癌 的发展中起到重要的作用。 在本实验中，我们用免疫组化法检测并分析了96例中国患者卵巢癌组织中 AM表达以及临床预后意义，并且通过迁移实验、蛋白印迹等实验研究AM在卵 巢癌细胞中的作用及机制。 实验方法 1、通过免疫组化染色SP法，检测96例卵巢上皮性癌中AM的表达，本实 验石蜡标本取自2004年01月至2008年12月在中国医科大学附属第一医院住院 行手术治疗，术前未行化疗和放疗，术后均经病理检查确诊的卵巢癌病例。由两 名病理诊断医师确定肿瘤的病理学分型以及组织学分级。 2、应用不同时间、不同浓度的AM作用于卵巢癌细胞H08910上，划痕实验检测 细胞迁移功能。 的受体CRLR，观察AM对不同细胞迁移功能的影响。 4、应用AM后利用流式细胞术检测细胞表面整合素0【5的表达。 量的变化。 的变化。 7、利用划痕实验检测整合素a5131抑制性抗体对细胞的迁移能力影响，及对 AM促细胞迁移作用的影响。 8、利用划痕实验检测PD98059对细胞的迁移能力影响，及对AM促细胞迁 移作用的影响。 迁移作用的影响。 磷酸化的影响，及对AM促FAK、paxillin磷酸化作用的影响。 ， 磷酸化的影响，及对AM促ERKl／2、AKT磷酸化作用的影响。 实验结果 一、AM的表达与EOO的临床病理学参数相关性研究： AM在EOC细胞的胞膜以及胞浆中表达，部分癌旁间质以及血管内皮细胞中 也可以见到AM蛋白表达。AM的表达与FIGO分期呈J下相关，AM高表达提示不 明显少于低表达组。并且高表达组的总生存时问也少于低表达组。根据COX单因 素风险分析得出AM高表达是卵巢癌无瘤生存时间和总生存时间的风险因素。 二、AM促进卯巢癌细胞H08910的迁移： AM促卵巢癌细胞H08910的迁移作用为时问依赖性和剂量依赖性。应用 2 中的愈合率较对照正常细胞的愈合率稍降低，并且提前1小时加入AM22．52可以 拮抗AM的促迁移作用。应用siRNA干扰CRLR后的细胞迁移率低于阴性对照 lOOnM作用后CRLRsiRNA干扰组的细胞迁移 siRNA转染后的细胞，并且在AM 率明显低于对照组。 513 0细胞整合素Q 1的表达，并且 三、外源性AM可以提高H0891 II i i n的磷酸化： 促进下游蛋白FAK，pax AM提高整合素a581活性的表达。应用流式细胞仪检测阴性对照细胞以及 化。 i n干扰AM 四、AM促进细胞AKT的磷酸化，AKT抑制剂Wortmann