tgev s基b和c抗原位点片段的真核表达及与原核表达产物抗原性的比较.pdfVIP

摘要 gastroenteritisvirus,TGEV)是冠状病毒科、冠状病毒 猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible 属成员，引起猪的传染性胃肠炎(Transmissiblegastroenteritis，TGE)，感染仔猪死亡率很高， 呈世界范围分布，严重危害养猪业的发展。TGEV与猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的疾病在 临床症状上很相似，基因组结构上猪呼吸道冠状病毒(PRCV)与TGEV具有较高的同源性，传 统方法很难鉴别诊断。 为诊断TGEV感染及对TGEV进行流行病学调查，本研究采用真核表达系统(杆状病毒／ 组蛋白，并与原核表达的含有B和C抗原位点的重组蛋白进行了抗原性分析比较。 粒纯化，与线性化的杆状病毒共转染SD昆虫细胞，经3轮蚀斑筛选，获得了纯化的重组病 毒。制备高滴度的重组病毒，实现了在昆虫细胞内的蛋白表达．优化表达条件后，对表达蛋 白的可溶性进行了分析，获得了可溶性的重组蛋白。SDS—PAGE分析表明：重组蛋白大小约 为33KD，Western Blotting检测结果表明，在杆状病毒／昆虫细胞表达系统中表达的重组蛋白 在变性条件下不能被多克隆抗体特异性识别。纯化了原核表达的含有B和c抗原位点的重组 蛋白，经WesternBlotting检测，结果证实原核表达的重组蛋白在变性条件下可以被多克隆抗 体特异性识别。对两种表达蛋白进行了蛋白浓度的测定，并分别通过Dot-ELISA试验进行1} 变性条件下的抗原性分析比较，证明了在真核系统中表达的重组蛋白抗原性相对更强。本研 究为最终实现TGEV血清学诊断方法的建立提供了必要的物质基础。 关键词TGEV；纤突蛋白；抗原表位；表达；纯化；抗原性比较 ofBandC SitesofTGEV Expression Antigenic Spike Genein and with EucaryotaeAntigenicityComparison theProtein in Prokaryosyte Expressed Abs仃act Porcinetransmissible tothe coronaviridae．The family gastroentedtisvims(TGEV)belongs viruscausestransmissible a11breedsand of its gastroenteritis(TOE)inagespigs．Particularly inthe under2weeksold reach100％．TGEVhasbeen worldwideaRer mortality may spread pigs onthe thevirusencodedS thedomesticTGEVwasisolatedin1973．Spikeprotein surfaceof by afe gallstimulatedthe comistof andD site geue protectiveantibody,Sgene