eiavlt,fddvgt;疫苗株免疫马后部分体液免疫指标的监测与表达eiav受体和荧光素酶报告基因的293细胞系的建立.pdfVIP

摘要 的作用，为其它慢病毒疫苗的设计提供借鉴，将5匹EIAV阴性健康马分为2组，第l 组(甜、硎、8撑、 组。 免疫接种后210的天内，定期采集血清，利用ELIsA方法对不同试验马免疫后血清 中针对E【Av结构蛋白p26以及囊膜蛋白的抗体进行了检测，通过监测p26以及囊膜蛋 白特异性抗体滴度、p26蛋白特异性抗体的亲和力变化、囊膜蛋白特异性抗体亲和力和 抗体构象变化，发现该疫苗株免疫马后第3周出现针对p26以及囊膜蛋白的特异性抗体， 其抗体滴度的个体差异性较大，但都维持在较低水平；p26以及囊膜蛋白的特异性抗体 亲和力虽有波动，但亲和力水平较高：囊膜蛋白特异性抗体的构象指数都在2．O附近波 动，表示囊膜蛋白特异性抗体主要为构象性抗体。免疫100天后囊膜蛋白的特异性抗体 水平没有大的变化，p26抗体水平非常低，但其抗体亲和力水平却较高。免疫2lO天后， 对每匹马进行体温监测，攻毒后，对照马(5群马)在第lO天出现发热，第16天死亡， 其它所有免疫马未见体温升高和其它临床症状，说明FDDVll毒株能够产生良好的免疫 保护作用。研究表明马传贫驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株产生的体液免疫与马传贫致病株感 染马后产生的免疫保护中的体液免疫截然不同，暗示体液免疫在EIAV感染马免疫保护 中的作用可能需要进一步评价，同时也为其它慢病毒疫苗的设计提供参考。 此外，为了在体外精确、简便地测定马传染性贫血病毒(EIAV)的中和抗体和研究 不同毒株与受体亲和性的差异，以真核表达质粒pcDNA3．1+为载体，插入马慢病毒受 其下游的萤火虫荧光素酶(Firefly 胞增殖时，表达病毒编码的反式激活蛋白(1at)能反式激活UR，使萤火虫荧光素酶 后检测其荧光强度是对照的3．15倍。培养表明，该细胞系传35代其特征未发生改变， 确认构建成功。此细胞系接种EIAv驴胎皮肤细胞适应毒株后，间接免疫荧光检测证明 了病毒在细胞内的感染。该细胞系的建立为进一步开展ElAV与细胞受体相互作用以及 中和抗体评价等的研究奠定了重要基础。 关键词：EIAv；体液免疫应答：囊膜蛋白抗体；p26抗体；受体：UR；荧光素酶；细 胞系 Abstract to Inorder tllehl蝴Ii姗unemechallismofthe甜咖ationand of iIlvestigate pmtcction cells infectio邺锄emia t11is donkcycrIlbryo—skillanenuatI葩equiIle vin垮(FDDv-E【AV)，In dividedinto study，fiveEIAv-negalivehorseswererandomly twD毋．oups，f．ourhorses(酣，7撑， l 1IIll wereinoculatedwinl onc 2 8撑锄d嘶)iIlG∞up ofFDDV-EIAV wereserved吼vaccinal[edcoI加r01．Wittlin21O horse’ssenlm dayspost-illoculation，seclectcd andthendectcdand of p26 env-specificaIl_tibody’avidityantibodvand∞v-specificantibody ttlat and 印itopeconf．o姗ati∞dependeIlce．Fo硼dp26 env-研ecificantibodyemergerenced a矗er3weeks titerof