eimeriatenella表面抗原基因sag10和λmzp5—7在毕赤酵母中的表达.pdf

摘 要 鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)主要寄生在宿主盲肠的粘膜下，引起出血性肠炎， 致病力强，严重影响养殖业健康发展。目前使用抗球虫药是防治肉仔鸡病的主要手段，但抗 药性和药物残留等问题限制了球虫药物的广泛应用。研究表明重组球虫抗原免疫鸡后能产生 一定的保护力，保护性抗原基因是其免疫功效的决定因素。球虫表面抗原基因saglO、LMZP5 —7是重要的候选基因之一。怂l四5—7的免疫保护作用已被证实，saglO基因在子孢子入侵 和裂殖子生殖阶段均有表达，具有潜在的研究价值。本实验目的是在甲醇营养型毕赤酵母中 表达Eimeria tenella表面抗原基因，为研审!隋效球虫基因工程疫苗提供新的途径。同时也为 下—步进行免疫保护研究提供材料。 本文提取Eimeria tenella表面抗原基 号L08257、AJ586552设计引物，应用RT--PCR技术扩增得到E／mer／a 致共948bp，编码3 较，结果表明，saglO基因编码序列与文献报道的序列同源性为99．01％，该球虫表面抗原基 因全长708bp，编码236个氨基酸。其中有7个核苷酸与报道序列差异，4个氨基酸序列有 Blot进行检测，分别在大约 贝重组菌株，摇瓶水平进行诱导表达。SDS和Western 36 能i瓣异性抗体所识别，具有生物学活性。9带选到表达量最高的菌株S7在5L发酵罐进行优 化表达，随着甲酵的诱导发酵上清中SAGl0蛋白不断累积，当诱导120h后生物量达到最高 354mghllL，重组蛋白占总蛋白量的34％。 关键词：Eimeria tenella；表面抗原；毕赤酵母；表达 ofEimeriatenellasurface Expression antigengene in and入M四5—7 saglO Pichiapastoris Abstract cecalcoceidiosishastremendous theworldbecauseof i冽012poultrythrou曲out and lossinaffected of consequentmortality,morbidityweight birds．ControlEimeriatendin is the poulny by presentlyaccomplishedprophylacticclmnottm印y,butrapidemergeneeofdrug resistant with and ledtoasearch difficulty pa豳eouplod expense0fde吲啦gI踟崦has fornew tococeidiosiscontrol and approaches involving genetical methods．Of is moIe effect t}蹴immunologicalapproach