gp、gpm双pcr方法的建立及gpv vp3基因的克隆与序列分析.pdfVIP

摘要 小鹅瘟(Gosling GPMv)引起的烈性传染病。该病以消化道病变为主要特征，具有高度的发病率和病死率，给养鹅 业带来了严重的危害。小鹅瘟和鹅副粘病毒病在临床症状上比较相似，很难进行鉴别诊断。为了能 对临床病例进行早期诊断，了解小鹅瘟和鹅副粘病毒病的混合感染情况，建立和研究特异、敏感、 快速的双重PcR诊断方法具有重要意义。对黑龙江省GPv分离株的vP3基因进行克隆和序列分析， 可为小鹅瘟的诊断与防治提供理论依据，并具有重要的流行病学意义和实际应用价值。 两种病原体引起的传染病进行鉴别诊断，且特异、 敏感、快速、简便。利用此方法对2005年5月_8 月黑龙江省9个市、县送检的病死雏鹅进行检测，结果表明7个市、县的病料均为GPv感染，未检 测到鹅副粘病毒。 根据GPvB株基因序列，设计了扩增GPvVP3基因的3对引物，对7个地区小鹅瘟病料及疫 克隆及序列测定，并与GPv国内外己发表的毒株进行序列比较。结果表明，各分离株的vP3基因 异；与国外报道的B株同源性为96．4—97．1％。各分离株与国内疫苗株进行序列比较，同源性为 97．6—98．3％。测序结果表明vP3基因3’端核菅酸相对于5’端保守，vP3II区序列为高变区。序列分 析还发现vP3蛋白的4个糖基化位点均表现出高度的保守性。由此可见，GPv黑龙江各分离株间 duck 小病毒(M11Scovy 性为80．7-81．5％。 关键词：鹅细小病毒，鹅副粘病毒，双重PcR，克隆，序列分析 Abstract infe吲on aTlacuteandsub-acute diseasewhjchinducedG00se GoslingP1ague(GP)is septicemic by infe谢0nwithGPMV inour isch姗ct甜zcd parvovims(GPV)．Since1997，the eruptedcountrywhich by diseasewitha of and aserioushazardQn morbi击ty djge鲥ve highdegree mon州吼whjchbmught a11dGPMhassimilarclinical infectedmixedl difncultto is 4quaculnlre．GP symptoms，0nce y，it ideIlti母 a11d fornocharacteristic orderto ofclinical dia印osis path0109iedchaIlge．1n earlydiagnosis cases， a doublePCR meIllodisof establisbingdisnn州ve，s朋sitive，andrapid diagnos吐c greatsign讯cance．The for血e oft11e artjclecam酣out and Analysis VP3 GPVin cloningsequencing atheoretica】b商s and a11dhas