celo禽腺病载体的构建及fiber 1部分片段的原核表达.pdf

摘 要 体研究的主要工具之 。CELO病毒的基因组中fiber 1和舶“2基因表达的两个纤突蛋白与该病毒 的毒力和免疫原性相关。缺失fiber l基因后病毒依然能复制，但失去野生型病毒特有的特异性转 导作用。本试验就是利用这一特性构建了复制型重组CELO病毒载体，另外根据肋er l的C端抗体 结合区Knob．s区进行了原核表达。 根据GenBank(序列号U46933)中CELO病毒的基因组序列，利用Primer 5．0设计一对特异 因组序列的27150-30760bp，其中包括舶er1全基因和侧翼序列)，克隆到pMDl8一T载体上，获 过荧光、PCR、电镜检测重组病毒。 根据GenBank中CELO病毒的fiber1基因序列，选取了fiber1蛋白的免疫优势区域，利用 P『imer l的 5．0设计一对特异性；f物，以Fc为模板，扩增了其中807bp的目的片段(位于fiber IPTG诱导外 源基因的表达，获得54．6ku的目的蛋白；薄层扫描显示，重组蛋白占菌体总蛋白高达的35．7％： WeStemblot试验表明，目的蛋白具有较好的抗原活性。 本研究构建TCELO病毒载体系统，期望能在体内外基因治疗中发挥作用，并为今后禽类腺 l蛋白的免疫活性片段，可以为进一步 病毒载体疫苗的进一步研究奠定了基础。另外表达Yfiber 建立CELO病毒的EUSA诊断方法，进行现地的血清学监测提供技术支撑。 1，原核表达 关键词；CELO病毒，载体，fiber Abstract Chicken lethal virus(CELO)isas classified embryoorphan afowladenovirus 1(FAV-1) type andisthe ofavian for nowitis majorsubject adenovirologymanyyears．And asa beingdeveloped for vector vaccine fiber1 andfiber2 ofCELOare system design．The genes forviral responsible virulenceand CELO with fiber1 virusthatwas immunogenicity．The genome disruptedgene