dot-ppaelisa快速检测猪丹毒抗体方法的建立及应用研究.pdfVIP

中文摘要 具有不同抗体效价的免疫猪和对照猪进行皮肤内接种攻毒，确定了猪能抵抗混合强毒攻 击的抗体保护阳性标准为l：32。本试验方法用国产硝酸纤维素膜为固相载体制备的诊 断膜片特异性强，不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪肺疫、猪链球菌病、大肠杆菌、仔猪副伤 寒、猪布氏杆菌病、猪衣原体病的阳性血清发生交叉反应；该方法敏感性高，能够最低 检出猪血清中含2．61×10母g的猪IgG抗体；膜片保存期长，在室温可保存4个月，4 ℃可保存7个月其检测活性不变。通过对免疫猪免疫后6周的抗体检测，证实 Dot-PPA．EI ISA能用于疫苗免疫猪后的抗体效价变化监测。本试验方法操作简便、快速 准确、结果客观、易于判定，结果可存档、重复性好，所用试剂材料均可做到标准化， 适合基层应用和猪群的猪丹毒抗体监测以及猪丹毒的流行病学调查。 关键词：Det-PIA-ELISA猪丹毒抗体 引 言 1概述猪丹毒是由猪丹毒杆菌引起的一种人、畜共患传染病，临诊可表现为急性败血 型、亚急性疹块型或慢性增生型(心内膜炎、关节炎、淋巴节炎)，有时还可引起母猪 流产和小猪腹泻【l～。猪丹毒广泛分布于五大洲的各个国家，是猪传染病中重要而古老 的病种之一。1979年Koch从家鼠分离到猪丹毒杆菌，当时命名为“鼠丹毒败血菌”， 猪丹毒是一种自然疫源性疾病，至今世界各国尚未彻底净化本病，可给养猪业带来了重 大的经济损失，对人类健康也构成威胁。我国是猪丹毒流行较广泛的国剥引。近年新发 现，少数牛源丹毒丝菌对猪或鼠有致病性，能引起猪发热和全身或局部荨麻疹。提示牛 在猪丹毒流行病学中的作用14、5】。另外还发现对小白鼠不致病的猪丹毒弱毒菌株，其培 养物保存于20~30℃的恒温箱中，经过一定时间，其毒力可增强【6】。家鼠是猪丹毒的一 种传播媒介，经研究发现蚊虫吮吸病猪的血液后，蚊虫体内带有猪丹毒杆菌。经证明传 染性胃肠炎病毒可增强猪丹毒杼菌的致病性【_”。 2猪丹毒杆菌的抗原结构猪丹毒杆菌的抗原构造至今尚不十分清楚，已知在细胞肇上 有耐热的粘肽和糖肽等类物质，它们具有型特异性，是血清型分类的基础，其耐热性抗 原可以用琼扩法进行猪丹毒的分型，但Chin等【8】证实在热提抗原中还含有大分子蛋白质 抗原。除型特异性耐热肽糖抗原外，多数猪丹毒杆菌有一种或多种共同的不耐热抗原， 对不周猪丹毒型和株的细胞蛋白分析发现红斑丹毒丝菌的电泳图谱包括大约20个条带， EDTA，CHAPS，Triton X和SDS提取的主要蛋白分子量是78，72，68和48KD。 3猪丹毒杆菌的血清型和致病性至今已发现la、】b、2、3～-24和N型共26个血清型， 同的血清型【l13q61。不同血清型猪丹毒杆菌对流行病学、免疫防制、实验诊断均有重要 意义。其致病力及免疫原性与菌型有一定关系，l型菌的致病力较强。2型菌的免疫原性 较好，弱毒株的斑清型眈较复刹灞。飙患败血穗猪丹毒痛侧分离的菌抹，95％{；盂上为la 戮；麸皮肤疹块凝疯爨靼慢性关繁炎瘸铡分离的壤株gO％轶上怒ta嚣2跫11取域；扶髂袭 和健康猪扁桃体分离的菌株多数为2型，常常几个血清测菌株同时存在∞o“。鳋小自鼠 羧痰链试验，豫扶授径癃爨器毽豢猪体分离翡部分蘩椿静，其余鳇搀表蕊凄强毒症状。 引起猪慰性经过戚全身发疹的大多为l型和2测的菌株，其它的血清型藏株虽程猪的按 瓣受获弱释弓l起凝显魏发疹，鼹雾数辩猪不虽致病牲。我蓬菰葬逢分离虢猪爵舔蓄撩缎 搬清学撩定．缎瘸的绝火多数是I型和2型[22“2毗。从水嫩动物分离的猪丹毒杼麓的血潦 攒鞍多，徐尧勤等辖霹分离出19种矗清攒，致瘸力试验寝弱，擞类和承难动物分离的猪 丹毒杼越慰，j、囱凝兵考较强鲍致瘸力，多数蓠株瓣猪天羧瘾力。扶禽类分离的猪丹毒轷 黼韵血滴型也较多，各种血清测菌株对小自鼠和猪的致病力遨比猪源性猪丹檬菌株弱 黼。 4猪丹毒诊断讲究进展 4．1褒寐鬻缎毽掌诊辩：瘫凑粒缨萤学梭套是诊凝急链猪秀毒懿最哥靠学段，懑逶猪丹 瓣的临床症状和有时皮肤出现的特征性菱形疹块，脾脏肿大，缄膏霉素治疗有效可初步 麓诊。然后，掰选择璐养薹对瘸辩避豁绷蓠分离，逶过对分离薷的生妖、染惑殿形态、 生化特蚀进行鉴是确诊。 4．2斑消学诊断 有多静盘渣学试验鼹予猪静毒熬诊麟，彀摄平扳、试管、徽囊试警凝囊试验，季}傣 结合试骏，生长凝集试躲，被动赢凝集试验，觚凝抑制试验，间接血凝试验，璩扩沉淀 试验，荧滢挠搏试验，酶骥受痰骧嚼