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第三节 色谱分离法 色谱法是一种现代化的物理化学分离、分析方法。 特点： 优点：三高一快 ①选择性高：可将性质相似，结构相近的组分分开。 ②分离效率高：能一次分离多种组分。 ③检测灵敏度高：能分析10-11~10-13g的物质，适于微量和痕量分析。 ④分析速度快：几分钟、十几分钟、几十分钟完成分离，一次 可以测多种样品 ⑤应用范围广：气体、固体、液体 基本概念： 固定相：在色谱分离中固定不动，对化学成分产生保留的一相。（固体或液体） 流动相：色谱过程中与固定相处于平衡状态，携带待测组分向前移动的物质称为流动相。（气体或液体） 基本概念： 活化：在一定温度下加热去除吸附剂中的水分，使其吸附能力提高，活性增强的过程。 去活化：向吸附剂中加入一定量水分，使其吸附能力降低，活性减弱的过程。 液相色谱：流动相为液体的称为液相色谱。 气相色谱：流动相为气体的称为气象色谱。 分类 吸附色谱——利用固定相中吸附剂表面对各组分 不同的物理吸附能力(气—固色谱） 分配色谱——不同组分在两相中有不同的分配系 数(气—液色谱) 离子交换色谱——利用离子交换原理(离子色谱) 凝胶色谱——利用多空性物质对不同大小分子的 排阻作用(液相色谱) 吸附色谱法 2.固定相及其选择 固定相是表面具有许多吸附中心的吸附剂，常用吸附剂硅胶表面的硅醇基为吸附中心。经典液相柱色谱和薄层色谱使用一般硅胶。 （1）对吸附剂的要求 ①有大的表面积和足够的吸附能力； ②对不同的化学成分有不同的吸附力，能较好地把混合物分开； ③与流动相、溶剂及样品中各成分不起化学反应； ④在所用的溶剂及流动相中不溶解； ⑤颗粒均匀，操作过程中不会碎裂。 薄层色谱法 二、分配色谱法 1.分离原理：将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体)表面上作为固定相，利用被分离组分在固定相与流动相中的溶解度差别所造成的分配系数差别而被分离。 2.固定相和流动相 要求： 固定相→机械吸附在惰性载体上的液体,常用的固定液有水、稀硫酸、甲醇、甲酰胺等强极性溶剂 载 体→惰性物质，无吸附性性质稳定，不与固定相和流动相发生化学反应常用的有吸水硅胶、纤维素、多孔硅藻土等。 流动相→必须与固定相不为互溶石油醚、醇类、酮类、酯类、卤代烷及苯等。 3.洗脱顺序 正相色谱 固定相极性大于流动相极性,主要分离极性样品.极性弱的组分先被洗脱，极性强的组分后被洗脱。 反相色谱 固定相极性小于流动相极性,主要分离非极性样品和中等极性样品.极性强的组分先出柱，极性弱的组分后出柱。 纸色谱法 定义： 纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。 仪器试剂 主要仪器： （1）玻璃层析筒 150mm×300mm(φ×h)。 （2）层析纸条 100mm×240mm 。 （3）毛细管 直径1mm左右。 （4）喷雾器 仪器试剂 主要试剂： （1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。 实验步骤 数据处理 （1）计算RF。 （2）定性分析。 四、聚酰胺吸附色谱法 聚酰胺： 固定相 流动相 （3）吸附规律： [1] 形成氢键基团数目越多，则吸附能力越强 [2] 形成氢键基团位置不同，被吸附的强度也不同 [3] 分子芳香核、共轭双键越多，吸附越牢 [4] 化合物形成分子内氢键，则被吸附的强度减小 [5]与溶剂介质有关.形成氢键能力: 水中最强,碱中最弱 五、离子交换色谱法 要求： 固定相→离子交换树脂 流动相→水为溶剂的缓冲溶液 被分离组分→离子型的有机物或无机物 1.分离原理 2.固定相和流动相 固定相是离子交换剂 ——常见的是离子交换树脂，是具有网状立体结构高分子的聚合物。如，苯乙烯和二乙烯苯聚合 ，其中二乙烯苯是交联剂。 流动相——水、缓冲溶液、或加入少量的乙醇、四氢呋喃、乙腈等有机溶剂，提高选择性 六、凝胶色谱法 凝胶色谱是基于分子大小不同而进行分离的一种分离技术（分子筛）。它具有一系列优点：操作方便、不会使物质变性、适用于不稳定的化合物、凝胶不用再生、可反复使用。缺点：分离速度较慢。 六、其他色谱法 （一）大孔树脂色谱法 （二）气相色谱法 用气体作为移动相的色谱法。根据所用固定相的不同可分为两类：固定相是固体的，称为气固色谱法；固定相是液体的则称为