基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱法研究蛋白质的标记反应.pdfVIP

第 卷 分析化学 （ ） 研究简报 第 期 30 FENXI HUAXUE 2 年 月 2002 2 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 162 ~ 164 !!!!!!!! ! 研 究 简 报! ! ! ! !!!!!!! 基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱法研究蛋白质的标记反应 ， 1 2 2 3 3 韦寿莲# 邓光辉 郑一宁 莫金垣 1 2 （肇庆学院轻化系，肇庆 526061） （广西民族学院化学化工系，南宁530006） 3 （中山大学化学化工学院，广州510275 ） 摘 要 利用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱法研究了商品化的生物素和异硫氰荧光素（ ）标记的 FITC 胰岛素的组成。其后利用基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱法在位监控了生物素标记胰岛素的反应。结 果发现：（）商品化的标记胰岛素是一个多种标记比共存的混合物，而且两种商品化的标记胰岛素均包括了未 1 标记的胰岛素；（）标记物与蛋白质的摩尔比是决定标记物组成的重要因素，过高浓度标记物的使用有可能导 2 致一些异常组份的生成。 关键词 基体辅助激光解吸电离，胰岛素，标记反应，生物素，异硫氰荧光素 ! 引 言 标记蛋白质广泛应用在分子生物学、临床诊断、环境分析等领域。放射性同位素、酶、吸光、荧光和 ［，］ 1 2 化学发光染料等已经成功地被用作蛋白质的标记物 。标记蛋白质的来源有两种：（）自己制备；（） 1 2 化学试剂公司。几乎无一例外，均提供一个质量指标：标记比。很少见有详细组成成分的报道。这是因 为目前广为使用的方法难以提供这方面的信息。众所周知，标记产物的纯度和标记比的大小是影响分 析方法检测灵敏度的重要因素。 基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ matrix-assisted Iaser desorption/ ionization time-of-fIight mass spectrometry ）近年来得到了飞速发展，广泛应用于生物大分子，高分子聚合物和活细胞等的组成分析，比 ［］ 3 较而言，有关标记蛋白质的报道甚少。最近LapoIIa 等人 借用该法详细评价了健康人和糖尿病人IgG ［］ 4 的糖化（ ）程度。 等 结合毛细管电泳法研究了小分子在蛋白质上的修饰位置。 saccharization Kurian