液相色谱法测定茶叶中黄曲霉毒素B1.pptVIP

陈玉森 学号液相色谱法测定茶叶中黄曲霉毒素B1 1、 黄曲霉毒素，aflatoxin,简写AFT。 一、概述 为黄曲霉产毒菌株的代谢产物，属超剧毒物质。 尤以AFTB 1 最为重要，毒性最强。 2、 理化性质 （ 1）溶解性：难溶于水和乙醚、石油醚、已烷等非极性或弱极性溶剂中。易溶于甲醇、氯仿、乙腈等极性溶剂中，溶于苯。 （ 2）定性：对光、热、酸稳定；对碱和氧化剂不稳定。 光：AFTB 1 和AFTG 1 溶液，日光照1d，分解仅40%。得低浓度纯品易为紫外光破坏。故标准品宜用黑纸包裹储存。 热：开始分解温度 B 1 ，268～269℃ 酸：弱酸和中性介质中稳定；强酸和碱性条件下分解。 pH＜?时分解； pH=9～10时迅速分解成几乎无毒的盐（内酯键打开）： 氧化剂：对氧化剂也不稳定，氧化剂浓度越大，分解速度越快： C NaClO (g/L) 破坏AFT所需的时间 54.5(g/L) 立即 50(g/L) 5s 40(g/L) 1min 30(g/L) 2min 20(g/L) 3min 10(g/L) 5min 5(g/L) 30min 故实践上常可用漂白粉、氯、高锰酸钾、过氧化氢等消毒。 3、 毒性 （ 1）为已知的100多种霉菌毒素中毒性最大的，属强致癌性物质[有报道说，其毒性比氰化钾更大，约大100倍，比B（a）P大4000倍]，可对动物造成急性中毒，也可引起慢性中毒和致癌、致畸、致突变。它在WHO确定的重点研究毒物中被列为首位。 1） 各种 AFT的毒性大小并不相同： 顺 序 B1 G1 B2 M1 G2 M2 B2a LD 0.36 0.78 1.7 3.2 3.5 12 240 (50mg/kg ) 注：对鸭雏，LD50小于50mg/kg即为剧毒物 美国研究结论， 1μg/kgAFTB1可使大白鼠致癌；我国研究，20μg/kg可使大白鼠致癌。 （2） 与人致癌的关系 黄曲霉毒素高污染地区，其肝癌发病率明显较高。如江苏的启东，福建的铜安，广东的汕头，广西的抹援，为我国 4个肝癌高发病地区。 （2）污染 调查 很广泛，各种粮食中均可检出，核桃、乳及其制品、干辣椒中也有检出。但以花生、玉米、棉籽及其制品污染最为严重，稻谷、高粱其次，“三麦”甚微。 （ 1）污染特点 玉米：胚部污染； 花生、棉籽：整粒污染但仅限于少数颗粒； 小麦：皮层污染。 （2）污染 调查 1976～1978年，粮食部组织，调查了18个粮种，取样19122个，检出7233个，检出率37.7%,其中超标率占49.2%。 主要粮种情况（ μ g/kg）： 玉米，平均 400，最高1000～1200；(所以不要吃玉米) 花生，平均 200～500，最高50000；(所以不要吃花生) 花生油，平均 400，最高8000；(所以不要吃花生油) 稻谷（洞庭湖）平均 50～100，最高330。(所以不要吃稻谷) 总体分布，广西、福建、江苏污染最严重，山东以北诸省污染少。 5、 限制标准（ ≤ μ g/kg ） （ 1）GB 花生、玉米、花生油及其制品， 20； 大米及其它食用油， 10； 其它粮食、豆类、发酵食品， 5； 婴儿代乳品，不得检出。 （ 2）国外标准（μg/kg） FAO/WHO，15； 美国， 25； 加拿大， 15； 日本， 10； 印度， 30； 以色列、瑞典，不得检出。 1.适用范围 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。 2.原理概要 样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 三氯甲烷； 正己烷； 苯； 甲醇：紫外光谱级； 乙腈：紫外光谱级； 三氟乙酸； 乙腈-水溶液(1＋1)； 三氯甲烷-甲醇溶液(95＋5)； 苯-乙腈溶液(98＋2)； 黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%； 黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。 3.2.仪器 液相色谱仪，配有荧光检测器； 硅胶小柱：Waters Sep-pak Silica前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱； 振荡器； 旋转蒸发器，配有100mL具尾管的圆底烧瓶； 微量注射器； 离心管：5mL具塞磨口； 粉碎机； 滤膜：有机系用，0.45μm； 微孔滤膜过滤器：有机系用，0.5μm。 4.试样的抽取与制备 4.1.检验批 以不超过20