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实验九 污染物的定性分析 ——分光光度计的使用（一） 一、目的要求 1、掌握用磺基水杨酸显色法测铁的原理和方法。 2 、掌握分光光度法的原理。 3、掌握分光光度计的使用方法。 4 、学会绘制吸光度曲线。 二、原理 1、分光光度法 （1 ）概念 ①光的本质是一种电磁波，具有不同的波长，可见光的波长范围在 400 ～760nm。波长范围 200 ～400nm 的光线称为紫外光。有色物质可以选择性地吸收一部分可见光的光能量而呈现 不同颜色，某些物质却能特征性地选择吸收紫外光的能量。 ②物质吸收由光源发出的某些波长的光可形成特定的吸收光谱。由于物质的吸收光谱与物质 的分子结构有关，而且在一定的条件下其吸收程度与该物质的浓度成正比，所以可利用物质 的特定吸收光谱对其进行定性和定量的分析。分光光度法就是利用各种物质所具有的这种吸 收特征所建立起来的分析方法。 （2 ）吸收光谱和物质的定性分析 ①用各种不同波长的光线作为入射光测定物质的吸光度（Absorbance ），然后以波长（λ） 为横轴，相应的吸光度（A ）为纵轴，按结果作图，可得到该物质的吸收光谱曲线。吸收光 谱曲线是物质的特征曲线。 ②在一定的温度、pH 值等条件下吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可找 到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax ）。物质不同，它们的最 大吸收波长也往往不同。 因此，一定条件下我们可以通过某种物质的吸收光谱曲线莱对其进行定性。 （3 ）常用定性方法 物质用分光分析定性主要根据是吸收光谱存在的特征吸收。 ①比较吸收光谱曲线。 ②比较最大吸收波长。 ③比较吸光度比值。 2、721可见分光光度计 分光光度计形式较多，但基本结构和原理相似，可用下图表示： 光源 单色器 样品室 受光器 测量器 仪器中光源经过单色器中的单色原件（如棱镜），所得到的单色光（入射光 ）进入样品 室，透出的光被受光器（光电池或光电色）产生光电流，放大后在测量仪上显示出吸光度（A） 或透光度（T）。 ☆注意：仪器的光电管或光电池对不同波长的光敏感度不一样，在制作吸收曲线时应注意每 换一次波长，都应将空白溶液的吸光度调整到 0。 1、使用步骤 （1）通电仪器自检预热 20 min。 （2）用MODE键设置测试模式为透射比（T）。 （3）波长选择：用波长调节旋钮设置所需的波长。 （4）调零：在 T方式下按“0%”键，此时仪器自动校正后显示“0.000”。 （5 ）调满：在比色皿槽中，依次放入参比液，样品液1 和样品液 2 等，盖上样品室盖(注意 透光截面垂直于光路方向)。将参比液拉入光路中，按“100%T”键调 T 为 100%，此时仪器显 示“BLA” ，表示仪器正在自动校正，校正完毕后显示“100.0”。 （6 ）样品测定：将MODE 转换为“ABSORBANCE” ，显色屏读数为 0.000 ，然后将样品液 分别拉入光路中，此时显示测得的样品吸光度。 2 、使用注意事项 (1)比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此，特别要将比色皿清洗干净。装样前处理： 自来水反复冲洗→蒸馏水漂洗 2 次→待装溶液漂洗 2 次。必要时，需用浓硝酸或铬酸洗液短 时间浸泡。 用完后用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿盒中。 (2)拿放比色皿时应持其“毛面”不要接触“光面”。 (3)若比色皿外表面有液体，应用擦镜纸朝同一方向拭干，以保证吸光度测量不受影响。 (4)比色皿内盛液应为其容量的2/3 ，过少会影响实验结果，过多易在测量过程中外溢，污染 仪器。 (5)比色皿的光面要与光源在一条线上。 3、用分光光度法测定铁 在 pH 9 ～11.5 的 NH .H O-NH Cl 溶液中，Fe3+与磺基水杨酸反应生成组成比 1:3 的黄 3 2 4 色稳定配合物。 - COO COO- 6- Fe