从感染黄瓜花叶病毒的烟草叶筛选抗病毒细胞突变体SelectionofVirus-resistantCellMutantsfr.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)19(4):1一31997 ·遗 *1 快 报 · 从感染黄瓜花叶病毒的烟草叶筛选抗病毒细胞突变体① 陈 廷 俊② 合（肥经济技术学院原料学系．合肥 230052) 摘 要 用绿岛法从感染CMV的普通烟草G（140）叶筛选到抗病毒细胞突变体Rcrty2.6，其当代无性 系群体病情指数软对照降低41.3一45.2% 关键词 烟草，绿岛，抗CMV细胞突变 SelectionofVirus-resistantCellMutantsfrom CM V-infectedTobaccoLeaves ChenTingjun (DepartmentofLeafTobaccoScience,HefeiInstituteofEconomicsandTechnology,Hefei230052) Abstract The2CMV-resistant-cellmutants,RcMv2 、6,wereselectedbyusingthemethodofcul- turingdarkgreenislandfromCMVinfectedtobacco(N.tabacum cvG140)leaves.Thediseaseindexof Rcmv-2,6swasdecreasedby41.5一45.2%incomparisonwiththatofthecontrol(G140). Keywords Tobacco,Darkgreenisland,CMV-resistant-cellmutants 黄瓜花叶病毒 简（称CMV）有植物界的“流感”与“癌症”之称，迄今无有效防治方法。裘维蕃 指出 ’〔〕，筛选抗性细胞突变体可能是抗病毒的有效途径之一。Carlson(2)曾设想，如果将植物 的叶片比作培养皿，则经诱变处理过叶片上的亿万个叶肉细胞及其克隆就是该器皿中的选择培养 基，一定条件下病原物可以在上面侵染危害或遭到抵抗而呈现 “绿岛”正（常深绿色区域），截取绿 岛进行组织培养并再生完整植株，很可能就是我们所需要的抗性突变。据此作者开展了烟草抗 CMV细胞突变体筛选的研究并取得初步结果． 1材 料 与 方 法 1.1供试品种 普通烟草N（.tabacumL.）品种G140，系我院烟草育种室提供，连年套袋自交留种，用当年 收获6月后种子，常规方法灭菌后播于经高压灭菌过的钵土中，防虫温室栽培，4-6叶期接种 CMV, 1.2供试毒源及其保存 ①国家自然科学基金资助项目。 本工作进行中曾得到中国科学院植物所王敬驹教授的鼓励与指导、顺致谢忱。 ②陈廷俊 男．55岁．大学毕业．副教授；专业方向为遗传学教学与科研 2 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1997 19卷 CMV强优势株系由中国科学微生物研究病毒室惠赠。在严格隔离条件下，待烟苗发病后截 取病株茎节，常规方法进行表面灭菌后植于1/2MS无机盐固体培养基，使腋芽萌生成苗，以 后每40-70天选取具有典型感CMV症状的试管烟苗转管1次；36月后按常规方法 ”〔制作病 叶超薄切片作透射电镜观察，检查病毒纯度。 1.3临界选择压的确定 于烟苗4-6叶期按常规摩擦法接种CMV后分别置不同温度、光照、营养等条件下每（处理 30盆），定期观察记载病情，以寻找一个使病株叶片全部畸变退绿的临界条件。 1.4烟苗诱变 烟苗3-4叶期在毒气橱中用脱脂棉包住心叶，每2h滴注一次新配制的0.3%EMS，连续4 次． 1.5绿岛培养 用前文(3（)已报道的方法。 1.6突变体对CMV的抗性鉴定 截取突变体当代带叶茎节沙床快繁 a〔)，使每个株系达25-30株，4叶期接种CMV后置 28士2C，自然光照条件下使其充分发病，按田波 ”〔的方法调查单株病级并计算病情指数，比 较其与亲本对照间的差异。 2结 果 与 讨 论 2.1试管烟苗保存CMV的效果 CMV在G140试管烟苗上经24次继续繁殖，历时42月。这段时间内作者先后 12次取毒源 接种带枯斑基因的三生烟或G14