H7N2禽流感病毒分离株的研究%3aⅢ.两株H7N2禽流感病毒血凝素蛋白全基因序列分析.pdfVIP

家禽传染病 4．2病理剖检表明，尽管大多数实验鸡在感染后来表现出严重的临床症状，但割检都可见相似的眼观病 理变化，并且这些变化与临床发病鸡的剖检结果相似，也符合有关文献对禽流感病理变化的描述【lJ。由此 说明这两株病毒对鸡均具有致病作用，是临床送检鸡发病的致病因素之一。 4．3病毒经人工接种SPF鸡后，从第7天开始，用H，血凝素抗原能检测到Ⅲ抗体，且抗体水平随时 PF实 间推移呈规律性变化，此结果再次证实了所分离的毒株确为码亚型AIV，同时说明他们能感染S 验鸡，刺激机体产生抗珥的特异抗体。 4．4两分离株经静脉接种SPF鸡后1周，可从鸡泄殖腔棉拭中回收到病毒，此结果说明病毒已经感染了 实验鸡，并能通过消化道排出，这意味着病毒具各在鸡体内增殖并向外界排出的能力。 死人的事件，而最近朝鲜也发现了H7亚型禽流感。虽然本研究结果表明目前的H7N2AIV分离株是低致病 力AIV，但应给予足够重视。国外曾有相关报道，当低致病力H7病毒出现以后，高致病力毒株可以随后 力AIV的监测，及时发现和控制感染。防止产生新的高致病力毒株，造成新的流行，进而威胁人类健康。 参考文献略 全基因序列分析 王传彬孙明田克恭王宏伟遇秀玲陈西钊 (农业部兽医诊断中心，北京100094) 亚型AIV GenBank中AIVHA基因序列进行了同源性比较、HA基因系统发育进化树分析和氢基酸编码分析。结果 以外)，其中包括HAl323个氨基酸，HA2221个alt氨基酸。两个分离株HA基因核苷酸序列的同源性为 而与以色列、意大利H7N2 H7亚型AIV的欧亚群系分支内。推导的氨基酸序列表明，其HA蛋白的裂解位点的氨基酸序列为 一KGR—GLF-，仅包含一个碱性氨基酸(R．)残基，符合低致病力AIV的基因特征。 关键词：禽流感病毒，H，N2亚型，HA基因，血凝素 HA蛋白是A型流感病毒囊膜上两种糖蛋白纤突之一，与NA共同组成A型流感病毒亚型的特异性抗 原，并可诱导动物产生中和抗体。是AIV的主要保护性抗原，在病毒入侵宿主细胞的过程中，起着重要的 作用，它裂解位点的氨基酸序列直接决定着AIV的组织嗜性与致病力“l。高致病力禽流感病毒，在靠近 HAO裂解位点处，有多个碱性氨基酸…．对HA基因的分析，有助于了解病毒的遗传演化背景。目前国内 H，N2禽流感病毒HA基因的特性尚未见报道。 本文在前期分离鉴定了H7N2禽流感病毒的基础上，测定分离株HA基因的核苷酸序列，推导其编丹 氨基酸序列，比较其HA基因与其它AIV分离抹的l-j源性，试图阐述其可能的来源及潜在致病性。 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 1材料与方法 1．1病毒 由本中心分离、鉴定并保存。 、 1．2分子生物学试荆 RNA提取试剂盒、反转录及PCR试剂等均为Promega产品；胶回收试剂盒：购自上海华舜公司． 1．3RT．PCR引物设计 参照已发表的禽流感病毒基因的各节段的序列和文献口】，设计针对HA基因节段的引物：上游： 转录通用引物：Unil25-AGCAAAAGCAGG一3’。引物均由赛百盛公司合成。 1．4禽流感病毒的增殖培养 取O．2mL 活性的尿囊液，．70℃保存。 1,5提取病毒总RNA 取含有病毒的尿囊液，按RNA提取试剂盒说明书介绍的方法进行。 1．6反转采合成第一链 按试剂盒说明提取病毒RNA作为模板，以Unil2为引物，反转录合成eDNA。反应体系为：H208ul，dNTP lul．RNA模板2ul混匀。经42℃，1小时反应；再经95℃，作用5分钟。 L7PCR扩增目的基因 反应体系为20止：H208此，dNTP(2，5mmol／p．L)2皿，MgCl2(15m 2此，10xPCR缓冲液2pL，ExTaq 94(245秒钟；55C45秒钟：72C7分钟，最后72*(210分钟，充分延伸反应。在2％琼脂糖凝胶中电泳， 分离扩增产物。 1．8核苷酸序列分析 按胶回收试剂盒说明书，从琼脂糖凝胶中回收、纯