藏绵羊DNA分子遗传标记地研究.pdfVIP

No．1 Animal BuBctin 7 (Octoberg_J306)V01．10 Biotechnology 藏绵羊DNA分子遗传标记的研究 马志杰卜，魏雅萍1，钟金城2肖玉萍3，才让当周4 (1青海省畜牧兽医科学院畜牧研究所，西宁810016； 2西南民族大学生命科学与技术学院，成都610041； 3中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州730050；4．青海省河南县畜牧兽医站，西宁811500) 种DNA分子遗传标记的原理和优缺点基础上，讨论藏绵羊分子遗传标记及其在遗传育种中的应 用现状和存在的问题，展望了今后的研究趋势和发展前景． 关键词：藏绵羊；DNA分子标记；育种 DNA分子标记作为遗传标记之一，是对基因水平上遗传变异的直接反映；与形态遗传标记、细胞遗 传标记以及生化遗传标记相比，它具有在物种基因组中存在普遍、多态性丰富、遗传稳定和准确性高等 特点。因此，已被广泛应用于遗传作图、基因定位、基因连锁分析、动植物标记辅助选择和物种的起源、 演化和分类等研究。目前，已有部分DNA分子标记被运用于藏绵羊的遗传育种研究当中。通过了解各 种分子标记在藏绵羊遗传育种中的研究现状，并分析比较各种分子标记在藏绵羊科研中的可行性和优缺 点，可为今后开展藏绵羊的基因定位、基因连锁分析、分子标记辅助选择以及起源、演化和分类等研究 提供必要的理论指导和经验借鉴，将大大加快藏绵羊分子育种进程。鉴于此，本文分析了藏绵羊DNA 分子遗传标记的研究现状，提出了作者的建议和看法，以便为今后的研究奠定理论基础利提供参考资料。 1DNA分子遗传标记的原理和特点 1．1RFLP和PCR-RFLP标记 l RFLP(RestricCionFragmentength DNA分子标记012l。其原理是：通过对基因组DNA进行限制性内切酶酶切消化，使其形成特定的不同 大小DNA片段，经电泳和Southem印迹转移至支持膜上，用特定的探针进行分子杂交，通过放射自显 影检出某一DNA片段或基因组的多态性。所涉及的基本步骤有：DNA的提取一限制性酶酶切分析—凝 型效应；②共显性；③非等位的RFLP之间不存在上位互作效应，互不干扰；④可用探针较多，能检测到 很多遗传位点；⑤重复性高，结果稳定可靠：⑥普遍存在于生物基因组DNA中，只要选用特异的探针 或限制性内切酶，将产生足够的标记。与此同时，RFLPs标记也有其不足之处；①对基因组DNA质量 要求高，需求量大；②实验操作过程复杂烦琐；③多态信息含量低；④具有放射性，对人体易造成伤害。 因此，在PCR的基础E建立和发展了PCR．RFIP技术，其基本原理和步骤是：用一对特定引物扩增基 因组DNA从而获得特定DNA片段，然后用相应的限制性内切酶对该扩增片段直接进行酶切，电泳技术 检测分析其多态性。该技术与RFLP技术相比，具有如下优点：①对基因组DNA质量要求较低，需求量 较小：②实验操作简单；③不需要克隆基因作探针；④不依赖Southernbot技术等。因此．PCR-RP-IP 技术得到了广泛的应用。 项目资助：青海省科技厅基础研究与软科学计划项目资助(项目编号：2006-Z-601) ‘马志杰(1978．)男，回族，硕士，助理研究员，甘肃省张家川县人．研究方向：动物遗传育种与繁殖 第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 1．2咖标记 Polymorphic RAPD(RandomlyArnplified 嘲。该技术主要利用DNA聚合酶链式反应，以人工随机合成的寡核苷酸单链为引物，基因组DNA为模 板进行PCR扩增反应，电泳、染色、凝胶成像系统拍照等过程来检测DNA多态性。与RFLP技术相比， RAPD有技术简便，快速灵敏，费用低，多态性强等优点。因此，目前被应用于种属分类鉴定、遗传关 系分析、外源导入基因的追踪、染色体上特异性DNA片段的鉴定、基因定位和基因分离、动植物遗传 连锁图的构建及分子标记辅助育种等方面。但该技术不足之处在于：①为显性标记，不能有效鉴别杂合子； ②易受反应条件的影响等。 1．3AFLP标记 ． AFI_P(AmpUncdFragment 因组DNA用特定的限制