高核酵母产RNA发酵条件地研究.pdfVIP

for lh before without of andafter 3h，2h targetgene；5-7，samplecultivating addingIPTG；8，sample and ofUPafterinduced thatlane1 makesa addingIPTG．(B)Locationanalysis expression．Except 4h withlane4andlane5isthe of for after are IPTG,others transposition samplecultivating adding identicalwith and ofTPafterinduced of PNR(C)Locationanalysis expression．The position isidenticalwithUR samples 2．3_【：样菌与野生荫的}舌。陀比较 由J：■个酶采朋／fi同的测i．彳方法以及测j工-x,t象的刁il可(村i酶和菌体)，故使用J’不同的 酶活定义，其中，PNP的狂i酶和菌体活。FI：根据定义1来计算；u’和TI，的根据定义2计算。 化酶，ifiifI．取得j-／1i错的效果，fLl我们考虑剑规模化酶法牛，^：核苻类似物可以赶接使用蔺体 反应，所以没仃对粗酶进行纯化。：_二个村{酶；舌性测定结果如农4。 4 i S Tab4Activiofthree datein’I’ab showedinmean． Ly unpurifiedenzymes，the 从表5可以看出，一个工程菌的活性要远远大J：野生菌的，而且．和Tab4中的粗酶活‘rI： 比较发现，除j-PXP菌体和料酶活’肚相荠／fi大外，LI，和TP的菌体和料酶活性有1定的出入， 当然这与酶活定义是自．关的，f}1．也看}}{反应受剑了f0质的‘』I．电影响。 Tabro Ct V CO are．1 n r n_)O b．1 nal 、●J CO【 ．L y }l mean the e n十L个● ab rf) —¨．．，1 SSlOWed．、^ n ． 3 d小 A乩结 la—d是高效表达核苷麟酸化酶的‘个t[4女f-的裁体， 通过奉实验的研究可以看…，pET一1 当然也得益于在BI．2l(DE3)中进行诱导表达。山于PCR，托物两端的酶切位点无法直接切扦， 所以我们构建了克降载体。这样使}j的蟮『司易于克隆剑农达载体jj去。存诱导表达时，为J7 得剑尽超多的具有沂陆的人然蚩白质，优化了表达条件，但IPl、G浓度的改变对包涵休的产 牛没仃多大影um最后优化的温度为28℃。通过；^’比的比较，我们可以叫显地看至0』二张菌 棚对两个野生菌的优异一阽。实验有待进‘步进行，在工程菌发酵条件的优化和它们存核苛药 物合成方而的应用正是我们F 1个阶段研究的重点。 高核酵母产RNA发酵条件的研究 唐文静l，丁庆豹1，欧伶1，周长林3，邱蔚然2(1、华东理工