嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)灭活苗对商品猪免疫保护效力研究.pdfVIP

猪的传染病 3 讨论 近年来，猪圆环病毒 2 型在世界范围内造成的经济损失日益严重，现已证实 PCV2 是断奶仔猪多 系统衰弱综合征的主要病原，PCV2 能造成免疫细胞数量减少从而使免疫应答能力降低，目前还没有 效的治疗措施。制备与病毒结合特异性强、灵敏度高的 PCV2 单抗对于病原的检测、疾病的诊断有着 重要的意义。 本文利用杆状病毒表达系统构建的重组杆状病毒免疫小鼠，利用杂交瘤技术，通过细胞融合、筛 选、鉴定，共得到 3 株能稳定分泌抗 PCV2 的单克隆抗体，分别为 5H6、4E2 、5F7，经间接免疫荧光 试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验，Western-blot 试验证明制备的单抗能与 PCV2 发生特异性反应， 从间接免疫荧光图中可以看出，绿色荧光居于细胞质和细胞核中，这与文献[13]报道 PCV2 感染 PK15 细胞后 ORF2 编码蛋白的抗原表位位于细胞质与细胞核中相一致，利用本文所制备的单克隆抗体可以 进一步研究 PCV2 在机体内的定位。 利用 3 株单抗对本室保存的 PCV1 、PCV2 以及嵌合型PCV1-2 毒株进行 IFA 排谱发现，3 株单抗 与 PCV2 毒株发生 IFA 反应，不与 PCV1 毒株反应，这就为 PCV1 与 PCV2 的鉴别诊断提供了依据， 而单抗不与嵌合型的 PCV1-2 发生反应，可推测该嵌合型的毒株在抗原性上与受检 PCV2 毒株有一定 的差异。由于 PCV2 毒株较少，以上单抗反应谱可能不能完全说明问题，因此还需做进一步的研究。 流式细胞术（flow cytometry，FCM ）是细胞生物学、分子生物学、免疫学和单克隆技术、激光技 术、电子计算机技术、流体力学等学科的综合发展的成果[14] 。由于单克隆抗体技术、定量荧光细胞化 学的应用使流式细胞术在生物学、临床医学等研究领域的应用愈来愈广泛。用可以结合特异性抗原的 单克隆抗体处理待分析的材料，再利用免疫荧光的方法和流式细胞技术相结合，即可辨认和区分出带 有特异性抗原的细胞，这就为检测细胞膜上或胞内含特异性抗原的细胞提供了一种简捷途径。本研究 利用制备的单克隆抗体 5F7 株，初步建立检测病毒感染细胞的 FCM 方法，为 PCV2 感染的检测提供 了良好的诊断试剂。 参考文献（略） 嵌合型猪圆环病毒（PCV1-2）灭活苗对商品猪免疫保护效力的研究 * 汪正亮，周金柱，王小波，李基棕，高杏，俞天琦，高崧 （扬州大学农业部禽用生物制剂创制重点实验室，扬州，225009 ） 摘 要 （目的）本文运用多功能细胞电穿孔仪将本实验室构建的重组pSK-dPCV1-2 质粒转染Dulac 细胞，传代培养 后收获嵌合型猪圆环病毒PCV1-2 。将该重组病毒灭活后与ISA 206 VG 佐剂乳化制成灭活苗，免疫商品猪以评价其免 疫保护效力。（方法）将42 日龄PCV2 母源抗体较低的20 头商品猪随机分成5 组，另外2 头作为健康对照组。通过检 测不同时间的间接免疫荧光抗体、中和抗体、攻毒后病毒血症以及病理变化和组织中的病毒载量等评价疫苗的免疫保 护效果。（结果）结果显示：二免后14 d，所有免疫组试验猪都表现为PCV2 血清学阳性，且中和抗体水平在 1/15～ 1/20。攻毒后21 d 扑杀试验猪，免疫组猪的淋巴结和各脏器的大体和显微病变都比攻毒对照组轻微。攻毒对照组的淋 巴结出现多核巨细胞和嗜酸性粒细胞，且有多量的淋巴细胞缺失，免疫组未见多核巨细胞，淋巴细胞缺失也较少。淋 4.0 5.0 6.0 巴结中PCV2 病毒载量在攻毒对照组为5.566±0.432，在10 TCID50 ，10 TCID50 ，10 TCID50 免疫组分别为4.469±1.023 ， 5.0 6.0 4.434±0.716 ，3.521±0.958，其中10 TCID50 ，10 TCID50 免疫组与攻毒对照组差异显著（P ＜0.05），但是，试验期