分子信标研究5-氟尿嘧啶对鼻咽癌HNE1细胞p33ING1基因转录水平的影响.pdfVIP

VOI. 27 高 等 学 校 化 学 学报 NO. 2 2 0 0 6 年2 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 268 ~ 270 ［研究简报］ 分子信标研究5-氟尿嘧啶对鼻咽癌HNEl 细胞 p33INGl 基因转录水平的影响 王 炜，刘 斌，李 军，王柯敏，谭蔚泓，唐红星 （湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，湖南省生物纳米技术研究中心， 湖南大学生物医学工程中心，长沙4 I0082 ） 关键词 分子信标；p33INGI mRNA ；5-FU ；鼻咽癌；药物敏感性 中图分类号 O629 . 74 文献标识码 A 文章编号 025I-0790 （2006 ）02-0268-03 p33INGI 作为一种重要的抑瘤基因，在乳腺癌及胃癌等恶性肿瘤细胞中的mRNA 表达水平显著低于 癌旁正常组织细胞中的表达，并导致这些肿瘤细胞的侵袭转移能力增强，对化疗药物及 射线和紫外 ! 线处理的敏感性降低. 然而，促进该基因转录水平升高能直接抑制肿瘤细胞的生长和阻止细胞的恶性 ［I ~ 4 ］ 转化，因而诱导该基因mRNA 表达升高的方法被广泛认为是治疗乳腺癌等恶性肿瘤的新手段 . 因 此，检测肿瘤细胞中的p33INGI mRNA 表达水平可为判断肿瘤恶性程度并开展有效的治疗和愈后评估提 ［5 ］ 供一个重要的参考指标 . 目前主要采用RT-PCR 方法检测肿瘤细胞中基因mRNA 的表达水平，但该 方法实验操作复杂，烦琐，易产生假阳性或假阴性结果［6 ］ . 本实验室建立的分子信标定量检测技术则 ［7 ］ 避免了RT-PCR 法的上述缺点 . 本文以我国高发性肿瘤 鼻咽癌细胞和化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU ）为研究对象，利用该技术 考察了5-FU 对鼻咽癌细胞p33INGI mRNA 表达水平的影响及该基因表达水平与细胞对药物敏感性的关 系. 结果表明，增加5-FU 浓度和延长作用时间都能诱导不同HNEI 细胞系中p33INGI mRNA 表达水平升 高. MTT 实验结果表明，p33INGI mRNA 表达水平与细胞对化疗药物的敏感性相关，p33INGI mRNA 表达水 平高的鼻咽癌细胞对5-FU 作用的敏感性增强. 该方法不仅能从基因表达水平上为考察化疗药物对肿 瘤细胞的作用效果提供依据，还在一定程度上为筛选肿瘤化疗药物提供了新的研究手段. l 实验部分 I. I 试剂与仪器 p33INGI 分子信标序列为5 -CGT TGA TGG TTC CAC TTC TCG TGC GT T CAA CG- DABCYL-3 ，5 端分别用TAMRA 和FAM 标记，命名为MBI 和MB2 ，cDNA 序列为5 -ACG CAC GAG AAG TGG AAC CA-3 . 对照用随机分子信标序列为5 -TAMRA-CTT GAC AGA CAT GCC TAG ACA TGC CT T CAA G-DABCYL-3 （MB3 ），以上序列均在大连Takara 公司合成. 5-FU 购自江苏南通精华制药有 限公司. 其余均为进口试剂. F-2500 荧光仪（日立公司，日本），TE-300 倒置荧光显微镜（尼康公司，日本）. I. 2 实验过