喹诺酮类药物与铜锌超氧化物歧化酶的相互作用及其对酶活性的影响.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第8期 of 1040～1044 2008年8月 ChineseJournal Chemistry Analytical 喹诺酮类药物与铜锌超氧化物歧化酶的 相互作用及其对酶活性的影响 魏薇1’2 王洪鉴1 江崇球“ 石敬民1 1(山东师范大学化学化工与材料科学学院，济南250014) 2(山东省济宁市环境保护监测站，济宁272100) 摘要利用紫外．可见吸收光谱和荧光光谱，在pH=7．4的生理条件下，研究了喹诺酮类药物(依诺沙星、 环丙沙星和诺氟沙星)与铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)的相互作用。喹诺酮类药物能使CuZnSOD的荧光 发生猝灭，其猝灭机理为静态猝灭。通过实验计算了不同温度下喹诺酮类药物与CuZnSOD的结合常数和结 合点数。依据FSrster非辐射能鼍转移理论，得到供体与受体间的距离。根据热力学参数确定了它们之间的 主要作用力类型是静电引力。进一步证实了活体动物兔子注射环丙沙星后，血液中铜锌超氧化物歧化酶活性 显著降低。 、 关键词 喹诺酮类药物，铜锌超氧化物歧化酶，荧光分光光度法 1 引 言 清的储存和运输产生作用，而且蛋白质能和许多抗菌药物结合。因此，研究药物和蛋白质的相互作用具 有重要意义B】。近年来，药物和人血清蛋白(HSA)相互作用的研究已有较多报道”∞o，而关于CuZn— SOD和药物的相互作用却很少见J。超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD，EC1．15．1．1)是广 泛存在于生物体内的一种由蛋白质和二价金属离子Cu2+和zn2+组成的，其主要作用是能专一地清除生 物氧化中产生超氧阴离子自由基，消除活性氧自由基对生物体的危害。在防衰老和一些肿瘤、炎症、缺 血再灌流损伤的恢复、自身免疫疾病，尤其是自由基引起的一些疾病如关节炎和类风湿性关节炎等治疗 中有良好疗效o¨9I。 本研究利用荧光光谱和吸收光谱研究了环丙沙星、依诺沙星和诺氟沙星与CuZnSOD的相互作用， 确定了受体一供体间的结合距离，分析了CuZnSOD与环丙沙星、依诺沙星和诺氟沙星结合机理，同时计 算了CuZnSOD与环丙沙星、依诺沙星和诺氟沙星作用的结合常数和结合点数，从分子水平上认识了该 反应的作用机理。通过邻苯三酚自氧化法确定喹诺酮类药物使CuZnSOD活性减小，且药物浓度越大 性显著降低，为以后临床上药物的配伍使用和疾病诊断提供了有益的信息。 2 实验部分 2．1仪器和试剂 (上海雷磁仪器厂)；4000r／min离心机(上海手术机械厂)。 mL0．20mol／L 大蒜CuZnSOD参照文献[10，11]提取，样品再用10 =7．60)溶解，依次过DE．32、G-25柱层析分离，浓缩透析，冷冻干燥，备用。依诺沙星储备液：准确称取 mL，得7．72× 一定量依诺沙星(ENX。中国药品生物制品检定所)，以石英亚沸蒸馏水溶解定容至100 10-4 mol／L工作液。环丙沙星及诺氟沙星 mol／L储备液。使用时以石英亚沸蒸馏水稀释得7．72×10‘5 moL／L 溶液的配制方法同依诺沙星。邻苯三酚(0．05mol／L，用0．10 HCI配制)。以上储备液和工作液 2007-1 I-07收稿；2008m3—13接受 本文系国家自然科学基金(No资助项目 ·E·mail：jitmgchongqiu@sdnu．edu．cn 万方数据 第8期 魏薇等：喹诺酮类药物