膀胱出口梗阻对逼尿肌收缩力影响及与神经支配关系.docVIP

膀胱出口梗阻对逼尿肌收缩力的影响及其与神经支配的关系 封建立，孙道冬，蒙明森，颜加强，刘元丰，康元上，舒勇，高瑾，孙丹宁400020 重庆，中国人民解放军324医院泌尿外科 [摘要目的 观察膀胱出口部分梗阻（partial bladder outlet obstruction,PBOO）不同阶段逼尿肌收缩力及神经纤维密度的改变，探讨PBOO对逼尿肌收缩力的影响及其与神经支配的关系。方法 近端尿道结扎法建立大鼠PBOO模型，实验动物分假手术6周组及8周组、梗阻6周组及8周组。测定膀胱排尿压及顺应性逼尿肌条收缩幅度；采用免疫荧光组化法检测逼尿肌神经纤维表达。结果 梗阻6周组膀胱排尿压及顺应性较对照组显著升高；梗阻8周组较对照组显著降低。梗阻6周组逼尿肌条收缩幅度较对照组显著升高，加入阿托品后逼尿肌条收缩幅度有所降低，但仍较对照组高；梗阻8周组逼尿肌条收缩幅度较对照组显著降低，加入卡巴可后无明显改善。梗阻组逼尿肌中神经纤维密度随梗阻时间延长降低。结论关键词膀胱出口部分梗阻；逼尿肌；神经支配 中图法分类号R361.2；R334.3; R363.14[基金项目] 重庆市自然科学基金（2012jjA1566） [作者] 封建立， E-mail：f-jianli@163.com膀胱出口部分梗阻(partial bladder outlet obstruction,PBOO)是指膀胱颈和近端尿道处各种原因导致的尿液流出道阻力升高，通常继发于良性前列腺增生症、膀胱出口纤维化以及后尿道狭窄等疾病。PBOO可以导致多种膀胱功能障碍性疾病，比如过度活动膀胱(overactive bladderOAB)、逼尿肌活动低下(detrusor underactiveDU)等。随着我国逐步进入老龄化社会，这些疾病发病率越来越高，严重影响患者生活质量，但是目前PBOO导致OAB或者DU发生的机制尚不清楚。既往国内外对于OAB的发病机制研究较多[12]，DU由于发病率较低，研究较少[3]近年来随着发病率明显提高，人们对其关注度逐渐。临床实践中，前列腺增生患者行尿动力学检查时膀胱功能可以表现为OAB或者DU，OAB和DU本质上是逼尿肌表现的两种相反的功能状态，因此我们推测其可能系PBOO后不同阶段逼尿肌功能的体现，其发病机制可能具有相关性和连续性。逼尿肌收缩活动受逼尿肌自身因素及其神经支配影响。我们前期研究发现PBOO后一定时间内可以导致OAB发生[4]，但OAB后持续梗阻对逼尿肌功能的影响不清楚。我们还发现PBOO后OAB的发生与自身肌源性改变关系密切[5]，但与神经的关系研究较少。本研究拟通过大鼠PBOO模型观察PBOO后不同阶段逼尿肌收缩力及其神经纤维密度改变情况，同时通过应用神经递质乙酰胆碱M受体(Muscarinic receptor)阻滞剂及激动剂来观察其对逼尿肌收缩力的影响，探讨PBOO后逼尿肌功能改变特点及其与神经的关系。 1 材料方法 1.1 实验动物及分组 清洁级健康雌性SD大鼠24只3月龄，体170～200 g，购自第三军医大学大坪医院动物实验中心。采用近端尿道结扎法建立动物模型[]。假手术6周及梗阻6周组。假手术组仅分离近端尿道，不结扎。1.2 主要试剂 兔抗大鼠anti-PGP9.5购自Abcam公司，Alexa 594标记的驴抗兔二抗购自Invitrogen公司细胞核染料DAPI购自碧云天生物公司阿托品卡巴可购自Sigma公司。 逼尿肌收缩力检测 1.3.1 在体膀胱充盈性测压将大鼠以25%乌拉坦行腹腔内注射麻醉(1.1 g/kg)，取仰卧位，纵行剖开腹腔，暴露膀胱（梗阻组解除近端尿道梗阻），先观察其排尿情况，记录尿量，然后将外径为1 mm的硬膜外导管经尿道外口插入膀胱，轻压大鼠腹部，测量残余尿，计算膀胱容量（尿量+残余尿量）。导管经三通管与及微量灌注泵相连。灌注速率为0.2 m/min。检测参数：排尿压(排尿最大压排尿阈压)、膀胱顺应性(膀胱容量／排尿阈压)。 离体逼尿肌条收缩检测断颈处死大鼠，于膀胱侧壁切取2 mm×7 mm肌条，置于38 ℃ Kreb’s溶液中，通以95% O2和5% CO2，平衡30后将肌条一端置于肌槽底端的固定挂钩上，另一端悬挂于张力传感器上并与电脑连接，通过RM6240生理信号采集处理系统进行记录。测定时为等张收缩，张力为0.3 g，每个肌条检测20～30 min。每次更换孵育液时均以37 ℃空白Kreb’s液多次冲洗肌条，待肌条的收缩活动恢复平衡后向孵育液中加入下一种浓度药物观察其对收缩的影响。 神经纤维密度检测 1.4.1 逼尿肌组织铺片制作断颈处死大鼠，结扎双侧输尿管，向膀胱内灌注4%多聚甲醛后结扎膀胱颈部。固定10后将膀胱取下，浸泡于4%多聚甲醛溶液中常温过夜。于膀胱侧壁剪取约3 mm×4 mm逼