基于SP细胞分选法初步鉴定卵巢癌干细胞表面标志.pdfVIP

东 南大 学学 tSoutheastUniv JSoutheastUniv嚣MMeedd医‘SScc学iEE版ddi)j2一。…。9，’～。ec；’2一8、(6)：4…9‘l一4…96 4·9l· 基于 SP细胞分选法初步鉴定卵巢癌 干细胞表面标志 张弦 ，蒋翠莲 ，王宝侣 ，刘蔷 ，左鹏飞 ，赵枫姝 ，窦骏 (1．东南大学 临床医学院，江苏 南京 210009；2．东南大学基础医学院 病原生物学与免疫学系，江苏 南京 210009) [摘要]目的：基于侧群 (sP)细胞分选方法，初步鉴定卵巢癌千细胞 (CSC)表面标志，为临床靶向治疗卵巢癌提供靶分子。 方法：检测、分离卵巢癌细胞株A2780中的sP细胞，并对sP与Non—SP细胞作细胞生物学鉴定，包括克隆形成能力、致瘤能力、 耐药性、定量ATP结合框蛋 白家族 G2蛋 白 (ABCG2)检测等；进一步用免疫磁选方法筛出ABCG2及 ABCG2一细胞，同样作上 述细胞生物学鉴定，探讨ABCG2分子能否作为卵巢CSC的表面标志。结果：卵巢癌A2780细胞株 中的sP细胞在体外强克隆 形成能力、裸鼠体内的高致瘤性、对化疗药物长春新碱较强耐受性及 高表达 ABCG2分子等生物学特性基本符合 CSC的特征。 ABCG2 细胞的克隆增殖能力略强于ABCG2一细胞；ABCG2 细胞的耐药性与SP细胞的耐药性一致。结论：A2780细胞株中 的sP细胞基本符合CSC的生物学特征，其高表达的ABCG2分子参与维持 sP细胞袁型，特别是多药耐药性。ABCG2分子可作 为靶 向治疗CSC的靶分子 ，逆转肿瘤的多药耐药性。 [关键词]侧群细胞；卵巢癌；癌干细胞；ABCG2分子；靶向治疗 [中图分类号]R737．31；R一33 [文献标识码]A [文章编号]1671—6264(2009)06-0491—06 卵巢癌是女性生殖器官常见肿瘤 ，发病率在妇科 中心。人卵巢癌细胞株A2780购于南京中医药大学， 恶性肿瘤中列居第三，但其致死率却为各类妇科肿瘤 于加 10％新生小牛血清的 1640培养液 中，在 37℃、 之首 J，因此，探索治疗卵巢癌的新途径，已成为进一 5％CO，环境下培养。 步提高卵巢癌患者生存率的关键。随着干细胞 (stem 1．2 实验方法 ceils，SC)研究的深入，人们发现肿瘤是一种sc疾病。 1．2．1 A2780细胞 中SP／Non—SP细胞流式检测和分 许多证据表 明，大多数的肿瘤组织中存在着具有 sC 选实验 特征的 “起始肿瘤细胞”(tumorinitialcells，TIC)，称 取对数生长期的单层培养细胞，制成单个细胞悬 为癌干细胞(cancerstemcells，CSC)，其是肿瘤增长、 液，实验组加入 Hoechst33342至终浓度 5 g·ml～， 耐药及复发的根源 J。分离与鉴定是 CSC研究的第 对照组再加人Verapamil至终浓度50 g·ml～，37℃ 一 步，由于CSC缺乏已知的统一特异性标记，分离和 水浴90min，重悬于冰冷的含2％小牛血清的PBS中， 鉴定成为 CSC研究 的难点。本研究主要通过侧群 上流式细胞分选仪 (fluorescence’activatedcellsorting， (sidepopulation，SP)细胞分选结合ATP结合框蛋 白家 FACS)检测 。以355nmuV激发光源、610nm双色短 族 G2蛋 白(ATP—bindingcassetteG2，ABCG2)等方法 通反射滤镜、450nm和 675nm边缘长通滤片分别检 初步研究卵巢 CSC，其 中SP细胞是指可将荧光染料 测散射光蓝光及红光部分，线性模式采集信号，将细胞 Hoechst33342泵出细胞外、表现弱荧光信号的细胞 中荧光信号分为两个部分，以Hoechst红点为 x轴， 群，占总体细胞的很少部分 J。在缺乏显著 CSC分子 Hoechst蓝点为 y轴作二维散点图，将低 Hoechst红点 标记的情况下，sP细胞的筛选分析可以作为CSC鉴定 及低 Hoechst蓝点且对照组缺失的区域设定为 SP细 的一种实用而简易的重要方法 。 胞的 “门” J，将只加入 Hoechst33342的实验组细胞