N-乙酰半胱氨酸对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.pdfVIP

山东医药2009年第 49卷第4l期 N一乙酰半胱氨酸对大 鼠肝脏缺血再灌注 损伤 的保护作用 张 勇h，李 玺 ，郝 林 ，鲍红光 (1南京医科大学附属南京第一医院，南京210006；2徐州医学院附属淮海医院； 3东南大学医学院附属徐州医院) 摘要：目的 探讨大 鼠肝脏缺血再灌注损伤 (HIRI)的机制及 N一乙酰半胱氨酸 (NAC)对肝组织的保护作用。 方法 将大鼠分成假手术组、HIRI组和NAC干预组，于再灌注 1、3、6、12h分别采用全 自动生化分析仪测定各组血 清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)水平；黄嘌呤氧化酶法测定肝组织中超氧化物岐化酶 (SOD)活性；免疫组织化学技术检测肝组织中肿瘤坏死因子 仅(TNF—Ct)表达。结果 HIRI组肝脏损伤较假手术组 更加明显，其中以再灌注6h损伤最严重；血清AST、ALT均较假手术组明显升高；肝组织 SOD活性明显低于假手 术组(P0．01)，于再灌注6h最低 ；肝组织TNF一表达明显高于假手术组(P0．01)，于再灌注6h达高峰。结论 NAC对大鼠HIRI有保护作用，其机制与NAC清除氧 自由基、减少细胞因子和炎症介质表达有关。 关键词：N一乙酰半胱氨酸；再灌注损伤；肿瘤坏死因子 d；肝脏 中图分类号：R657．3 文献标志码 ：B 文章编号：1002-266X(2009)4l-0031-02 肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)是休克、肝脏手术 干预组于阻断血流前1h腹腔注射NAC500mg／kg。 及肝脏移植术后的重要问题，直接影响患者的预后、 1．2．2 标本采集与检测 各组分别于相应时间点 手术成功率和存活率。N乙酰半胱氨酸 (NAC)是 采集标本进行检测。① 自下腔静脉采血2ml置EP 含巯基高效的自由基清除剂和抗氧化剂，近年研究 管中，静置30rain，低温离心 10rain，取血清低温冰 发现 ，NAC在缺 血再灌注损伤方面有很好 的疗 箱保存 ，采用全 自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 效u ，但将其用于 HIRI尚不多见。2008年6～10 基转移酶(AIJT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)水平。 月，我们将NAC用于大 鼠HIRI，探讨其在大鼠HIRI ②在冰盘上快速切取肝左叶(约 1．0cm×0．5ClTI× 中的作用及相关机制，为临床应用提供理论依据。 0．2cm)置 10％甲醛溶液固定 ，石蜡包埋 、切片 ，采 1 材料与方法 用免疫组织化学染色检测肿瘤坏死 因子 (TNF— 1．1 实验动物 健康雄性 SD大 鼠45只，体质量 )。③取部分肝脏置于冻存管中放人液氮保存 ，采 220～260g，由徐州医学院实验动物 中心提供。将 用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶 (SOD)活 大鼠随机分成假手术组 (Sham组)5只、HIRI组 2O 性。 只和 NAC干预组 (NAC组)20只。 1．3 统计学方法 采用 SigmaStat2．03对实验数 1．2 方法 据进行统计分析，结果 以x±S表示，组间比较采用 I．2．1 手术方法 大 鼠术前禁食 12h，自由饮水。 单因素方差分析，多组问两两 比较采用 q检验。P 采用 10％水合氯醛 1g／kg腹腔注射麻醉，仰卧固 ≤0．05为有统计学意义 。 定，打开腹腔，离断肝至横膈及腹壁的韧带，暴露肝 2 结果 门部，分离肝脏左、中叶肝蒂，无创血管夹夹闭通向 2．I 各组肝功能血清酶学指标 比较 HIRI组缺血 左、中肝叶的血流 (开始记时)，造成70％肝脏缺血。 再灌注 1、3、6、12h，血清 A 、AST均 明显高于 术中不阻断右叶肝血流，以防门静脉及 胃肠道淤血。 Sham组(P0．01)，于再灌注 6h达高峰。NAC组 观察肝脏表面颜色变灰 白，表明肝脏缺血成功。阻 再灌注各时间点血清ALT、AST也明显高于Sham组 断 1h后，松开血管夹，分别再灌注 1、3、6、12h，再 (P0．