反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞EGFR表达和增生抑制作用的研究.pdfVIP

维普资讯 眼科研究2004年l2月筮丝鲞苤 塑 607 · 实 验 研 究 · 反义寡核苷酸对人视网膜色素上皮细胞 EGFR 表达和增生抑制作用的研究 邱庆华 张 皙 高永峰 王 方 顾 青 Inhibitionofantisense0lig0nucle0tidesonEGFR expressionand proliferationofRPE cellinvivo QiuQinghua，ZhangXi，GaoYongfeng，WangFang，GuQing．DepartmentofOphthalmology， ShanghaiFirstPeople’SHospital，Shanghai200080，China Abstract 0bjective Tostudytheeffectofantisenseepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)oligonucleotides(ODN)on EGFRexpressionandproliferationofcuhuredretinalpigmentepithelium (RPE)cells． Methods Usingcationicliposome— mediatedmethod，EGFRantisenseODN(ASODN)weretransferredintohumanRPEcells，andEGFRgeneandproteinexpression weredetectedby semi—quantitativeRT—PCR and ELISA ，respectively．Cellhyperplasiawasevaluated by cellcycleanalysisand MTT． Results TheinhibitoryrateoftransferredantisenseEGFR ODNonproteinexpressionofEGFR was66．45％ at24hours． andthatonEGFRmRNAexpressionwas35．2％．Theinhibitoryrateofantisense0lig0de0ynucle0tides(MSODN)withlipofectin onRPEcellproliferationwas40％，andmissense0lig0de0xynucle0tidesshowednosucheffect(P0．01)．Cellcycleanalysis showedasignificantdecreaseinSphaseandaremarkableincreaseinG1／G0fraction afterexposuretoantisenseEGFR ODN in comparisonwithmissenseoligonucleotide—treatedcellsatthecorrespondingtime． Conclusion ThetransferofantisenseEGFR ODN intocuhuredRPEcellscaneffectivelysuppressEGFR mRNA andproteinexpressionaswellasproliferationofRPEcells． Keywords antisense0lig0nucle0tide ；epidermalgrowthfactorreceptor；expression；hyperplasia；retina 摘要 目的 研究反义寡核苷酸 (ODN)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞 ，表皮生长因子受体 (EGFR)表达和增生 的影响。 方法 采用人工合成反义 ODN经阳性脂质体包裹后转染人 RPE细胞。用 MTT和细胞周期分析检测转染 ODN后对细胞的生长抑制作用 ，采用半定量 RT—PCR法与 ELISA法检测 EGFRmRNA及蛋白的表达水平。 结果 显示 转染反义ODN24h后 ，E