几丁质酶与大豆抗胞囊线虫关系初步研究.pdfVIP

维普资讯 植物病理学报 ACTA PHYTOPATHOIOGICA SINICA 34(6)：555—557(2004) 几丁质酶与大豆抗胞囊线虫关系初步研究 吴海燕 ，段玉玺 (山东农业大学植保学院，泰安 271018；。沈阳农业大学植保学院，沈阳 110161) InteractionofchitinaseisozymeandsoybeanresistanttoHeteroderaglycines WU Hai—yan， DUAN Yu—xi (CollegeofPlantProtection，ShandongAgriculturalUniversity，Taian271018，China；。Collegeof PlantProtection，ShenyangAgriculturalUniversity，Shenyang 110161，China) 文章编号：0412-0914(2004)06—0555—03 几丁质酶作为病原物和寄主植物相互作用中 虫)，分别于接种后 10、13、17、20和 23d随机取样 的一种重要蛋 白质 ，已成为在植物抗病虫害研究中 3株 。 的热点。线虫卵壳及表皮的主要组成成分是几丁 1．3 根组织 中几丁质酶的提取 质 ，与真菌病原物一样 ，植物被线虫侵染时，可产生 几丁质酶_1J。Mercer等研究表明，植物几丁质酶在 参照Qiu等 ]的方法。 抗植物寄生线虫中起着很重要的作用，从菜豆提纯 1．4 胶体几丁质制备 的几丁质酶可提高根结线虫卵的孵化率，从而导致 称取 1．5g几丁质溶于 50mI…01otol·I 过早孵化的二龄幼虫死亡_l2]。目前有关植物几丁质 HC1中，约4～5h待几丁质完全溶解后，加入适量 酶抗病原线虫的研究极少。本研究通过比较不 同抗 的1otol·I NaOH使pH值为7，4C下12000g 性大豆品种在受大豆胞囊线虫侵染后 ，其根内几丁 离心 10min，沉淀用 50mI蒸馏水洗 ，离心 10 质酶活性的动态变化及抗感品种根内几丁质酶同 min。重复 4次，再用 0．1otol·I 、pH5．2的乙 工酶谱的差异，明确几丁质酶在大豆抗大豆胞囊线 酸钠缓冲液定容到 100mI，4C保存备用 。 虫中的作用，为进一步纯化几丁质酶，筛选表达抗 线虫的几丁质酶基因打下 良好基础，同时为分子抗 1．5 几丁质酶活性测定 病育种工作提供理论依据。 参考文献[1]，略有改动。OD 变化0．01的酶 l 材料与方法 量定为一个酶活单位U，以U ·g。。表示酶活性。 1．1 供试病原线虫及大豆品种 l·6 Glycolchitin的制备 病原线虫：大豆胞囊线虫 3号生理小种。供试 5gGlycolchitosan(购于 Sigma公 司)溶于 大豆品种 ：感病 品种辽豆 1O和开育 10；抗病 品种 100mI10 的乙酸溶液中，充分研磨 ，室温下过 夜，加入 450mI甲醇，真空过滤 ，向滤液 中加入 辽 K89102，Franklin，Peking和 PI437654。 7．5mI乙酐，磁力搅拌器搅 拌，悬液在 4C下 1．2 接种与取样方法