几种常见吸虫的分子系统发生学研究.pdfVIP

维普资讯 中国寄生虫病防治杂志 2004年 8月 第 17卷第 4期 August2004。Vo1．17．No．4 ·211 · ChinJ ParasitDisCon · 论著 · 几种常见吸虫的分子系统发生学研究 刘娟 ，李雍龙 ，刘文琪 ，龙小纯，沈定文 (华中科技大学同济医学院病原生物学系，湖北武汉 430030) 【摘要】 目的 研究 日本血吸虫、卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫、布 氏姜片吸虫和肝片形吸虫分子系统发生学的关系。 方法 利用PCR技术特异性扩增 日本血吸虫、卫 氏并殖吸虫和华支睾吸虫核糖体小亚基 (18SrDNA)的 V4区基因并测 序。根据 Oenebank，检索布 氏姜片吸虫和肝片形吸虫的相关序列 ，并与上述 3种吸虫的V4区基 因序列进行排列 比较 ． 计算它们的遗传距离并构建系统发生树。 结果 Et本血吸虫与其他吸虫的遗传距离远其他吸虫之间的遗传距离 。 在分子系统发生树中，日本血吸虫单独形成一个支系，其他吸虫形成另外一个支系。 结论 日本血吸虫与其他吸虫的 亲缘关系较远 ，它们可能来 自不同的祖先 。 【关键词】 吸虫 ；系统发生学 ；18SrDNA；分类学 【中图分类号1 R383．2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001—6627(2004)04—021卜O3 日本血吸虫、卫 氏并殖吸虫、华支睾吸虫、布 氏姜 M )22／1，dNTPs(每种 dNTP为 10reotol／I)0．5 片虫和肝片形吸虫是我国常见的吸虫 ，分布广泛 ，危害 1．引物各 10pmol／1，Taq热聚合酶 1U (biostar)， 严重。这些吸虫均属于复殖 目，大小、形态 、生活史各 加双蒸水至总体积 2oJ上l。PCR扩增条件 ：95C 预变 异 。传统的吸虫分类主要根据其形态 、生活史和生态 性 4min；94℃ 30S，58℃ 1min，72℃ 1min，共 35个 方面的资料口]，由于这些特征的演变非常复杂，并易受 循环 ；最后 72。C延伸 10min。取 PCR产物 5 l，混匀 环境等多种因素的影响，其准确性 、可靠性受到一定 的 后于 1 的琼脂糖凝胶 电泳，检测扩增效果 。 限制。2O世纪 7O年代 以来，随着现代分子生物学技 3 PCR产物的纯化和测序 术，尤其是 PCR技术和核酸 自动测序技术的迅速发 按常规方法，取 5O lPCR产物在 1．5 琼脂糖 展，DNA技术开始被应用于吸虫 的分类学研究，其 中 凝胶 中电泳 ，产物回收与纯化后 ，以上游 引物做测序引 DNA序列分析 由于其操作简单 ，结果准确可靠 ，提供 物 ，采用 Sanger双脱氧末端终止法，在 ABI一377型全 的信息丰富 ，成为研究分类学和种系发生学的有力工 自动测序仪 (美 国PE公司)上进行单反应测序 ，阅读 具之一_2]。本研究应用 FCR技术扩增 日本血 吸虫 、 碱基序列。 卫氏并殖吸虫和华支睾吸虫核糖体小亚基 (18SrD— 4 18SrDNAV4区基因序列的排列比较与进化树的 NA)的V4区基 因序列 ，测序后与布 氏姜片虫和肝片 构 建 形吸虫共同构建系统发生树 ，探讨它们之间的系统发 根据 Genebank，检索 出肝片形吸虫(AJoo4969)、 生学关系。 布氏姜片吸虫(LO6668)和单殖 目吸虫 Gyrodactylus rkocl