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StHY5基因在马铃薯低温胁迫中的功能解析
目录
文档简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
1.1.1马铃薯产业概况及其重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.1.2低温胁迫对马铃薯生长的危害．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
1.1.3光形态建成与植物抗逆性的关联性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
1.2研究现状述评．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
1.2.1光合色素蛋白复合体研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
1.2.2叶绿素a/b光调素蛋白的作用机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
1.2.3植物应答低温环境的分子机制研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21
1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
1.3.1主要研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
1.3.2关键研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
StHY5基因的克隆与生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
2.1实验材料与与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
2.1.1供试马铃薯品种与低温处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.1.2RNA提取与cDNA合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.1.3StHY5基因的RTPCR与克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
2.1.4生物信息学分析策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
2.2StHY5基因的序列特征分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
2.2.1StHY5基因序列鉴定与核苷酸组成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
2.2.2开放阅读框、编码蛋白预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50
2.2.3跨膜结构域与信号肽预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51
2.3StHY5基因同源性与系统进化分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54
2.3.1模式植物及马铃薯HY5基因检索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57
2.3.2系统发育树构建与比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58
2.4StHY5基因的表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61
2.4.1不同组织中StHY5的表达格局．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62
2.4.2低温处理下StHY5的时序表达变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64
StHY5基因敲除对马铃薯生理特性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65
3.1StHY5基因沉默载体的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71
3.1.1StHY5基因特异性引物设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72
3.1.2突然死亡载体构建与农杆菌介导转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．74
3.1.3转基因马铃薯的获得与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76
3.2畸变植株表型观察与测量．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．77
3.2.1转化体表型变异现象．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83
3.2.2生长指标测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．84
3.3生理生化指标测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．86
3.3.1叶绿素含量与光合参数测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．90
3.3.2丙二醛(MDA)与抗氧化酶活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．92
3.3.3
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