细胞实验基本操作与实验室要求.pptVIP

各种培养基在无机营养组成上的差异主要是盐和离子数量上的不同。据无机盐的含量可分为：高无机盐含量培养基硝酸钾含量较高培养基中等无机盐含量培养基低无机盐含量培养基应用最为广泛的培养基：MS。第62页，共125页，星期日，2025年，2月5日1、高无机盐含量培养基主要有MS和ER培养基。特点：钾盐、铵盐及硝酸盐含量较高。微量元素种类齐全。养分数量及比例比较合适广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。第63页，共125页，星期日，2025年，2月5日2、较高硝酸钾含量培养基主要有B5和N6培养基。适合于木本植物、十字花科植物和单子叶植物的组织和花药培养。第64页，共125页，星期日，2025年，2月5日3、中等无机盐含量培养基主要有Nitsch和NT培养基。特点：大量元素约为MS培养基的一半。微量元素种类减少，但含量较MS高。适合于花药培养。第65页，共125页，星期日，2025年，2月5日4、低无机盐含量培养基主要有White和Heller。特点：培养基大量元素含量大幅降低和种类减少。多数用于生根培养基。第66页，共125页，星期日，2025年，2月5日（二）植物培养基配制母液的配制和培养基的配制1．母液的配制母液的配制是按药品的种类和性质分别配制，单独保存或几种混合4~5oC保存。配制好的母液种类一般有：大量元素、微量元素、钙盐、铁盐、有机营养和单独保存的各种生长调节类物质。第67页，共125页，星期日，2025年，2月5日1、培养基母液的配制大量元素母液：10~100倍浓度。微量元素和有机营养母液：100倍浓度。混合定容：注意药剂的添加次序及稀释度，以免发生沉淀。钙盐和铁盐：分别单独配制。生长调节类物质：0.2~1.0mg/ml原液。IAA等醇溶性，先用少量95%酒精溶解，再用dH2O定容。KT、6-BA、2-Zip、ZT：先溶于少量1mol/L盐酸，再用dH2O定容。叶酸：先用少量稀氨水溶解后再定容。第68页，共125页，星期日，2025年，2月5日培养基的配制方法在干净容器中加入终体积约3/4的dH2O及所需要的琼脂和糖，煮沸溶解琼脂。不时搅拌以防止琼脂在锅底烧焦或沸腾溢出。加入所需量的各种母液及生长调节物质（不包括过滤除菌药剂）。加dH2O至近终体积，再次煮沸并加dH2O至终体积。充分混合后用1N盐酸或1N氢氧化钠调节pH值。冷却，加入过滤除菌药剂，分装，50ml培养基/150ml三角瓶，封口。高压灭菌，室温凝固备用。第69页，共125页，星期日，2025年，2月5日水药品糖混合pH调整加热溶解琼脂?玻璃器皿水洗干燥分装加塞高压蒸气灭菌植物培养基配制程序冷却过滤灭菌药品接种第70页，共125页，星期日，2025年，2月5日需加入过滤灭菌的药品，在高压灭菌后，培养基凝固前加入，并轻摇使混匀。培养基终体积定容时，可以利用台秤通过重量进行培养基终体积的确定。第71页，共125页，星期日，2025年，2月5日培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且会影响到琼脂的凝固。经高压高温灭菌后，由于某些成分的降解或氧化，酸度会增加（pH值一般可降低0.2），调pH值时应考虑。第72页，共125页，星期日，2025年，2月5日二、动物培养基动物细胞的营养要求比植物细胞的要复杂得多。目前，绝大多数动物细胞必须在培养基中添加血清等成分不明确的天然培养基成分，还不能在成分完全明确的培养基中生长繁殖。第73页，共125页，星期日，2025年，2月5日动物细胞培养基通常是液态。根据其是否能促进细胞生长，可分为：生长培养基（growthmedium）维持培养基（maintenancemedium）按来源，又可分为：

合成培养基

天然培养基。第74页，共125页，星期日，2025年，2月5日生长培养基生长培养基是指用来培养细胞使其快速生长增殖的培养基。对动物细胞来说，一般只要将生长培养基中的血清浓度降低或全部除去，就可获得维持培养基。第