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抑制剂类型公式VmaxKm无抑制剂竞争性抑制剂非竞争性抑制剂反竞争性VmaxKm不变增加减小不变减小减小第30页，共82页，星期日，2025年，2月5日六、酶活力的测定方法（一）.酶活力（二）.比活力（三）.总活力(四）.转换数第31页，共82页，星期日，2025年，2月5日第三章核酸一、要点提示第32页，共82页，星期日，2025年，2月5日重点核酸的概念和重要性(种类、在细胞中的分布、功能等）核苷酸（组成、DNA与RNA区别）DNA的结构?RNA的结构（各种RNA）?核酸的理化性质（变性、复性、Tm值等）第33页，共82页，星期日，2025年，2月5日二、DNA的结构DNA的一级结构就是指DNA分子中脱氧核糖核苷酸的排列顺序及连接方式。生物界物种的多样性即取决于DNA分子中四种核苷酸千变万化的不同排列组合。1、DNA的一级结构第34页，共82页，星期日，2025年，2月5日2、DNA的二级结构1953年J.Watson和F.Crick提出了著名的DNA双螺旋结构模型。注意DNA双螺旋结构模型的结构要点第35页，共82页，星期日，2025年，2月5日三?RNA的结构mRNArRNAtRNA三种RNA的一级结构和高级结构特点。第36页，共82页，星期日，2025年，2月5日两性性质紫外吸收核酸的水解变性、复性与分子杂交沉降电泳核酸序列测定四、核酸的理化性质涉及增色效应、减色效应涉及两种方法的原理第37页，共82页，星期日，2025年，2月5日（一）?双脱氧终止法(末端终止法)英国Sanger1955确定牛胰岛素结构，1958获诺贝尔化学奖1975设计出DNA测序法，1980获诺贝尔化学奖合成一段与待测DNA序列互补的DNA片段群。第38页，共82页，星期日，2025年，2月5日双脱氧终止法原理1、DNA的复制需要：DNA聚合酶，单链DNA模板，带有3‘-OH末端的单链寡核苷酸引物，4种dNTP（dATP、dGTP、dTTP和dCTP）。2、聚合酶用模板作指导，不断地将dNTP加到引物的3‘-OH末端，使引物延伸，合成出新的互补DNA链。3、如果加入双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）---在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基---故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键。4、采用聚丙烯酰胺凝胶电泳区分长度差一个核苷酸的单链DNA，从而读取DNA的核苷酸序列。第39页，共82页，星期日，2025年，2月5日（二）化学裂解法Maxam-Gilbert，1977原理：利用特异性的化学裂解法，制备出长度只差一个核苷酸的片段群，然后将此片段群经测序胶电泳和放射自显影得到测序图谱。WalterGilbert第40页，共82页，星期日，2025年，2月5日DNA化学裂解反应体系反应体系修饰试剂修饰反应链断裂试剂断裂点G硫酸二甲酯（DMS）G甲基化六氢吡啶GG+A甲酸/哌啶脱嘌呤作用六氢吡啶G和AC+T肼/哌啶嘧啶开环六氢吡啶C和TC肼/2mol/LNaClC六氢吡啶C第41页，共82页，星期日，2025年，2月5日基本步骤第一步，对特定碱基（或特定类型的碱基）进行化学修饰；第二步，修饰碱基从糖环上脱落，修饰碱基5和3的磷酸二酯键断裂；第三步，比较G、A+G、C+T、C和AC各个泳道，可从测序凝胶的放射自显影片上读取DNA序列。第42页，共82页，星期日，2025年，2月5日第四章维生素和辅酶一、要点提示第43页，共82页，星期日，2025年，2月5日维生素脂溶性水溶性ADEK在体内直接参与代谢的调节作用B1、B2、PP、B6、泛酸、生物素、叶酸、B12和VC等通过转变成辅酶对代谢起调节作用第44页，共82页，星期日，2025年，2月5日1）维生素的种类→组成特点及性质；2）水溶性维生素与辅酶的关系→辅酶在酶催化作用中起何种作用；3）注意维生素缺乏时所引起的后果。第45页，共82页，星期日，2025年，2月5日第五章生物氧化第46页，共82页，星期日，2025年，2月5日一、生物氧化的概念有机物质（糖、脂肪和蛋白质）在生物细胞内进行氧化分解而生成CO2和H2O并释放出能量的过程称为生物氧化。生物氧化通常需要消耗氧→又称为呼吸作用。区别体内氧化与体外氧化的差异第47