植物分子育种之细胞工程.pptVIP

植物细胞培养的意义1．悬浮细胞大规模培养生产天然植物成分2．植物细胞培养可进行突变体筛选第62页，共116页，星期日，2025年，2月5日植物细胞按照培养对象分类：单细胞培养单倍体培养原生质体培养第63页，共116页，星期日，2025年，2月5日2、植物单细胞培养方法(1)固体培养：是在微生物培养基基础上发展起来的植物细胞培养方法。一般添加一定比例的琼脂起固化作用。(2)固定化培养：属于固体培养，指将游离细胞包埋在多糖或多聚化合物制备的网状支持物中，培养液呈流动状态的无菌操作技术。第64页，共116页，星期日，2025年，2月5日(3)液体培养：也是在微生物培养基础上发展起来的。可分为:振荡培养旋转培养静止培养纸桥培养(4)细胞悬浮培养：属于液体培养，指植物细胞或小细胞团在液体培养基中大规模进行培养。第65页，共116页，星期日，2025年，2月5日(5)分批培养：又称成比培养，指在一个固定容积的培养基中培养细胞，当培养基中主要的营养物质耗尽时生长就停止。(6)连续培养：在培养过程中由于不断注入新鲜培养基，故培养液中营养物质能够连续得到补充，培养物的容积一般是恒定的。第66页，共116页，星期日，2025年，2月5日3、植物单细胞制备（1）获得植物单细胞三种途径由完整的植物器官分离单细胞的方法由培养组织中分离单细胞花粉叶肉组织是分离单细胞的最好材料。第67页，共116页，星期日，2025年，2月5日（2）．制备方法机械法：指通过机械磨碎、切割植物体从而获得游离的单细胞。优点：细胞不受酶伤害。缺点：只适合于排列松散的薄壁细胞、效率低、产量少。1969年，Gnanam和Kulandaivelu用该方法分离出几种成熟叶片叶肉细胞。第68页，共116页，星期日，2025年，2月5日酶解法：指用专一的水解酶在温和条件下分解胞间层，分离细胞。优点：最有效的一种方法。缺点：成本较高，酶对细胞有一定伤害。1968年，Takebe等用该方法分离烟草叶肉细胞成功。第69页，共116页，星期日，2025年，2月5日愈伤组织诱导法：指将愈伤组织反复继代，再转移至液体培养基振荡培养。添加生长素或酶。第70页，共116页，星期日，2025年，2月5日建立悬浮细胞培养系第71页，共116页，星期日，2025年，2月5日4、单细胞培养方法举例(1)．平板培养法指将一定量细胞接种到或混合到一薄层固体培养基里进行培养的方法。此法是Bergman(贝格曼，1960)首创。平板培养的优点是便于在显微镜下对细胞进行定点观察,选择单细胞株和筛选突变体。第72页，共116页，星期日，2025年，2月5日平板培养法具体步骤：①单细胞悬浮液的制备，并记数。②调节细胞密度。③培养基选择与凝固剂选择，浇平板。④接种培养。第73页，共116页，星期日，2025年，2月5日平板培养法第74页，共116页，星期日，2025年，2月5日（2）．看护培养与饲养层培养法看护培养：是指用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增殖的培养方法。谬尔（Muir，1953）首创此法。该方法的优点是简便易行，效果好。但不能在显微镜下追踪细胞分裂、生长过程。第75页，共116页，星期日，2025年，2月5日第76页，共116页，星期日，2025年，2月5日饲养层培养：是用处理过的、无活性或分裂慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长。饲养层培养具体方法有四种：①饲养细胞与靶细胞混合。②前者位于下层，后者相反。③一起培养于液体培养基中。④双层滤纸植板培养第77页，共116页，星期日，2025年，2月5日第78页，共116页，星期日，2025年，2月5日（3）．液体浅层静置培养法液体浅层静置培养法：指将一定密度的悬浮细胞放在培养皿中形成一浅薄层，封口静止培养。该方法优点：易于补加新鲜培养基，便于镜检。第79页，共116页，星期日，2025年，2月5日（4）培养细胞生长的测定方法①细胞计数法：用血球计数板，以cells/ml表示。②细胞体积：将细胞离心于离心管内，测定细胞层所占体积。细胞密实体积（PCV）法③细胞鲜重或干重第80页，共116页，星期日，2025年，2月5日（5）．微室培养是指在人工