液相色谱方法的开发.pptVIP

样品浓度对分析的影响0.02AU0.2AUPIC-B7的浓度很低,为0.001M,在样品浓度较大时,第③号峰由于PIC不足而分叉,见右图第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日离子对色谱分析水溶性维生素第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日用不同的离子对试剂色谱柱∶mBondaPakC183.9mm×300mm溶剂∶1.MeOH/H2O,PIC-B72.MeOH/H2O,PIC-B53.MeOH/H2O,PIC-B7/B5②①③④1.如用PIC-B7，在②③分开的情况下，保留时间太长②①③④2.如用PIC-B5，峰①②④分不开②①③④3.如用PIC-B7加B5，各组份分开，且保留时间合适第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日离子对色谱-水溶性维生素第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日对氨基苯甲酸与PICA试剂色谱柱:μBondapakC184mmx30cm流动相:MeOH:H2O,50:50含PICA流速:2.0ml/min检测器:UV,254nm第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日对氨基苯甲酸与PICB7试剂色谱柱:μBondapakC184mmx30cm流动相:MeOH:H2O,50:50含PICB-7流速:2.0ml/min检测器:UV,254nm第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日离子对色谱的优缺点优点:可用反相色谱分析离子离子和中性化合物可在同一次色谱分析中完成通过选择不同的PIC试剂可使选择性得到惊人的改善,特别是对中性和离子型溶质缺点:PIC试剂的平衡较慢推荐专用色谱柱作离子对分析当心PIC试剂在甲醇,乙腈等溶剂中沉淀当心用过的离子对试剂的化学污染第36页，共57页，星期日，2025年，2月5日用离子对？还是离子抑制？第37页，共57页，星期日，2025年，2月5日什么是梯度方法90/10,CH3CN/H2O80/20,CH3CN/H2O梯度:流动相的组成或流速随洗脱时间的变化而变化第38页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度洗脱的特点优点单位时间的分离能力增加检测灵敏度提高缺点仪器设备要求高不适合某些检测方式色谱柱需再生定量分析的重复性较低第39页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度洗脱的方式高压梯度及低压梯度溶剂A溶剂B泵A泵B混合器A高压梯度溶剂A溶剂B比例阀（溶剂混合点）混合器B低压梯度（溶剂混合点）泵第40页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度滞后:系统体积的影响死体积/谱带展宽体积(无色谱柱时)滞后(系统)体积滞后(系统)体积溶剂输送系统(泵)检测器进样器色谱柱梯度混合器溶剂输送系统(泵)高压梯度注意∶滞后体积包括进样器、阻尼器、混合器及其管路比例阀检测器进样器ABCD色谱柱溶剂输送系统(泵)低压梯度阻尼器混合器第41页，共57页，星期日，2025年，2月5日滞后体积大小的影响滞后体积太大会引起梯度变化的延迟例如∶滞后体积为2.0ml，流速1.0ml/min实际梯度会比设置值晚2分钟响应，没有问题对微柱色谱影响更大，如上例，流速0.1ml/min实际梯度会比设置值晚20分钟响应，不能接受滞后体积的不同会使方法转换麻烦滞后体积比文献大或小都会使方法不能重现普通HPLC的滞后体积为2~4ml对分析型HPLC没有影响对作微柱实验用梯度时影响较大，因此应选滞后体积小的液相色谱仪，以适应梯度实验第42页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度洗脱的可变参数A,B液的化学特性和配比梯度的起终点及陡度梯度变化的路径(梯度曲线形状)第43页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度曲线的变化∶凹线第44页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度曲线的变化∶凸线第45页，共57页，星期日，2025年，2月5日梯度平衡时间的影响10分钟的梯度，6分钟的平衡时间色谱图不重复第46页，共57页，星期日，2025年，2月5日?2004WatersCorporati