编号核酸检测篇9 digital pcr.pdfVIP

编号：2-9

：digitalPCR

概述：

DigitalPCR（dPCR)即数字PCR，它是一种分子绝对定量技术。相较于

qPCR，数字PCR可以直接数出分子的个数，是对起始样品的绝对定量。

数字PCR是的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的定量，是

一种绝对定量的方法。由于数字PCR能够直接数出分子的个数，是对起

始样品的绝对定量，因此特别适用于依靠Real-timePCR的Ct值不能很好分辨

的应用领域，例如：拷贝数变异、突变检测、相对表达研究（如等位不

平衡表达）、二代结果验证、miRNA表达分析、单细胞表达分析等。

目的：

对分子的个数进行绝对定量。

原理：

其主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的

溶液分散至的微反应器或微滴中，每个反应器的模板数少于或者等

于1个。这样经过PCR循环，有一个分子模板的反应器就会给出荧光

信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可

以推算出原始溶液的浓度。

步骤：

1.分离并纯化组；

2.数字PCR实验，确定样品的最佳稀释度，以获得数字PCR答案；

3.上样，将样品与TaqManAssay以及OpenArray数字PCR预混液上

样到OpenArray384

4.循环和成像，利用OpenArrayAccuFill系统将反应上样到OpenArray平板。

将OpenArray平板OpenArray箱中，装满浸液，并用封箱胶水密封。利

用OpenArray®实时定量PCR系统开展。

5.快速轻松地获取和分析数据。

流程图：