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ELISA检测乙肝抗体组员：李家成〔1520220102〕林其聪〔1520220103〕付强〔1520220104〕郑海军〔1520220105〕管汝〔1420221143〕分工汇报：林其聪PPT制作：李家成，付强第一页，共二十页。ELISA检测乙肝抗体第二页，共二十页。肝外表抗体ELISA检测实验目的1.掌握ELISA的原理和操作方法。2.熟悉酶标仪的使用方法。第三页，共二十页。免疫标记技术免疫标记技术是用荧光、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反响。细胞1细胞2标记物分类荧光素放射免疫技术放射性核素免疫荧光技术酶免疫酶技术第四页，共二十页。免疫酶技术用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反响。可用酶标测定仪测定光密度(OD〕来反响抗原或抗体含量，灵敏度可到达ng—pg/ml。细胞1标记物DH２+H２O２D+2H2O酶具有高效催化性：可加快化学反响的速率；在反响前后没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用第五页，共二十页。酶免疫技术酶联免疫吸附试验酶免疫组化法用于检测可溶性抗原或抗体用于检测组织或细胞外表的抗原第六页，共二十页。酶联免疫吸附试验-ELISAELISA是一种免疫测定〔immunoassay，IA〕。抗原或者抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记：参加酶反响的底物后，底物被酶催化成为有色产物；产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。第七页，共二十页。酶联免疫吸附实验—ELISA实验原理抗原或抗体吸附到固体相载体外表后，以及抗原抗体与酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应第底物时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标体中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反响的深浅进行定性或定量分析。第八页，共二十页。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法有三个必要的试剂：〔1〕免疫吸附剂〔2〕结合物〔3〕酶反响的底物第九页，共二十页。ELISA的类型间接法〔测抗体〕双抗体夹心发〔测大分子抗原〕竞争发〔测小分子抗原〕第十页，共二十页。第十一页，共二十页。第十二页，共二十页。竞争法用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体外表，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混合液，而另一组加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差即为所要测定的未知抗原的量。这种方法所测定的抗原只有一个结合部位就可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点就是快，因此只有一个保温洗涤过程，但常需用较多的酶标记抗原。第十三页，共二十页。操作步骤1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。3.每孔加酶结合物1滴〔孔上方悬空滴加，无气泡〕，混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。4.取出反响板，弃液，拍干。5.每孔注满洗条液，〔不要溢出〕静置5秒后弃液，拍干，重复洗条5次，拍干。6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。待1待2待2阳性阴性空白第十四页，共二十页。