蛋白质结构分析技术.pptVIP

1.对原材料的要求应具有高度均一性2.晶体生长的生化，物理条件pH值，离子强度，温度等3.技术和方法分批静置法(batchmethod)悬滴法(hangingdrop)4.蛋白质晶体的鉴定一.蛋白质结晶和晶体生长Crystallization第31页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.晶体的收集和处理2.X射线源的选择阳极靶式同步加速器辐射3.衍射线记录装置照相底片或图像板（对X射线敏感）计数管或面探测器4.衍射数据收集的全自动化二.衍射数据收集Datacollection第32页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.数据的统一和还原2.同晶置换法single/multipleisomorphousreplacement(SIR/MIR)3.分子置换法Molecularreplacement(MR)4.多波长反常散射法Anomalousscatteringandmultiplewavelengthanomalousdispersion（MAD）5.差值电子密度法三.确定位相Phasing－核心问题第33页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.电子密度修饰2.分辨率3.分析电子密度图4.全自动化程序发展四.电子密度图诠释Mapinterpretation第34页，共49页，星期日，2025年，2月5日1.R因子2.限制性最小二乘修正3.全自动化软件4.结构模型表达五.结构模型精化Refinement第35页，共49页，星期日，2025年，2月5日第1页，共49页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的氨基酸序列分析生物质谱X-射线晶体衍射技术核磁共振溶液中蛋白质分子构象的研究方法蛋白质组第2页，共49页，星期日，2025年，2月5日第一节蛋白质和多肽的

氨基酸序列分析Synopsis:1.Apracticalapproachtodeterminingaminoacidsequencerequiresamethodtoremoveoneaminoacidatatimefromapolypeptidechain.2.Thisisachievedbytheuseofphenylisothiocyanate（异硫氰酸苯酯）astheN-terminallabellingreagent,theEdmanmethod.3.Thistechniquecanonlydealwithchainsof20to60aminoacids,andmostproteinsaremuchlarger.4.Tocompletetheprocess,selectivehydrolysisofthepolypeptidechaincutsverylongpolypeptidesintospecificfragmentsofmoremanageablesize.第3页，共49页，星期日，2025年，2月5日N端序列分析Sangerwasthefirstpersontodetermineaproteinsequence,forinsulinin1953.Theproblem:afterlabellingtheN-terminalaminoacid,thepolypeptidechainmustbehydrolysedtoisolateandidentifythelabelledaminoacid.Whatsneededisawaytoremovethefirstaminoacidwithouthavingtohydrolyzethewholechain.ThiswassolvedbyPerEdman,inSwedenin1956,byusingther