情境二细胞原代培养任务一鸡胚成纤维细胞原代培养83课件.pptxVIP

2025/7/211情境二细胞原代培养任务一鸡胚成纤维细胞原代培养2025/7/211

2025/7/212过程二取材分散接种

鸡胚成纤维细胞原代培养2025/7/213

2025/7/2142025/7/21凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞的培养与建系4

2025/7/2152025/7/21125一、培养室的无菌操作1、培养前准备制订实验计划、操作程序、实验数据；准备：器材、物品置于超净台；（细胞、培养液）各种物品75%酒精擦拭后，再放入超净台。2、超净台消毒紫外线照射30min,细胞和培养液不能照射；物品排放整齐，不要过多重叠，否则效果降低；实验前75%酒精擦拭台面；原代细胞的取材5★

2025/7/2162025/7/211253、防护戴手套，75%酒精/0.2%新洁尔灭消毒手和手臂；戴口罩，不允许讲话（支原体）；有条件，白大褂、帽子.4、无菌操作操作前，过酒精灯火焰消毒，冷却后使用；瓶口、瓶盖、移液管、胶塞、镊子等手不能拿出超净台，否则重新擦拭。6

2025/7/2172025/7/21125台面物品摆放有序，左手：右手，酒精灯居中；移液管/枪头不能交叉使用；移液管等不能触及瓶口、皿口等；瓶口倾斜，瓶盖竖放，皿盖半开，防止细菌落入；吸管口向下倾斜，防止液体倒流。不能在开启容器上方操作。在超净台中央无菌区域操作。枪头盒用后盖上。火焰附近操作。

2025/7/2182025/7/21125?取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。一、取材基本要求1．取材要注意新鲜，否则1cm3、4℃保存，24hr内使用2．严格无菌3．防止机械损伤→锋利刀片切割4．去除无用组织（血液、脂肪、结缔、坏死组织），避免干燥5．记录：组织类型、分化程度、年龄等，留好样本原代细胞的取材

2025/7/2192025/7/216.原代培养，需营养丰富（10%-20%胎牛血清，进口）7.各种组织培养的难易程度胚胎组织较成熟个体组织易培养分化低的较分化高的组织易培养肿瘤组织较正常组织易培养★

2025/77/21二、各类组织的取材技术皮肤和粘膜的取材内脏和实体瘤的取材血液细胞的取材骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材动物组织取材人胚体组织取材鸡（鸭）鸟类胚胎组织取材

2025/77/21皮肤和粘膜的取材上皮细胞培养来源：来源：主要取自于手术过程中的皮片；消毒：体表微生物多，严格消毒，不能用碘酒=〉影响细胞生长；面积一般2-4mm2；不要太厚，尽量去除皮下和粘膜下组织。★

2025/77/21内脏和实体瘤的取材内脏除消化道外基本是无菌的；明确、熟悉所需组织的类型和部位；实体瘤：取肿瘤细胞丰富区域；要避开破溃、坏死液化部分，以防污染；尽量去除混杂的血管、神经和结缔组织。

2025/77/21血液细胞的取材血细胞：一般多抽取静脉血淋巴细胞：从淋巴组织中（如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等）分离细胞；取材时应抗凝（肝素）常用浓度20U/mL针筒用500U/mL肝素润湿。

2025/77/21骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材严格无菌；离心PBS洗两次培养液洗一次，培养。

2025/77/21鼠胚组织取材引颈或气管窒息法处死孕期鼠；75%酒精浸泡5分钟（时间不能长，否则酒精从口或其他通道进入体内，影响组织活力）；无菌图钉固定四肢在消毒木板上；切开皮肤，无菌取胚或无菌止血钳挟起皮肤、沿躯干中部环形剪开皮肤，挟住两侧皮肤拉向头尾，把动物反包，暴露躯干，取出胚胎。★

2025/77/21鼠胚肾（或肺）取材幼鼠采用上述方法处死消毒后，腹部/背部朝上固定在木板上；腹部朝上，无菌打开胸腔取肺。或背部朝上，无菌取肾。

2025/77/21鸡（鸭）鸟类胚胎组织取材取孵化9-12天的胚蛋；灯检有丰富血管、胚体运动的胚蛋，划出气室和胚体位置；用温水清洗蛋壳，再用75%酒精棉球擦干；无菌打开气室，沿气室边缘去除蛋壳；无菌取出鸡胚。

2025/77/21（一）悬浮细胞的分离方法组织材料：血液、羊水、胸水或腹水；方法：采用1000r/min的低速离心10分钟。离心后各种比重不同的细胞在分层液中分层，这样可根据需要收获目的细胞。注意：速度不能过高，时间不能过长，以免挤压细胞，引起损伤和死亡。三、组织材料的分离

2025/77/21（二）实体组织材料（组织块）的分离方法实体组织材料，细胞间结合紧密组织细胞充分分散，形成细胞悬液机械分散法（物理裂解）消化分离法。

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