情境1淀粉酶的发酵生产任务2淀粉酶产生菌的改良72课件.pptVIP

②营养缺陷型的筛选办法诱变剂处理淘汰野生型检出缺陷型夹层培养法限量补充培养法逐个检出法影印接种法鉴定缺陷型菌丝过滤法抗生素法淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例较低（百分之几～千分之几）。需选用适当的方法淘汰为数众多的野生型菌株，达到“浓缩”极少数营养缺陷型的目的。过滤法是使能在基本培养基上生长形成菌丝体的野生型留在滤膜上，不能生长的营养缺陷型孢子则能透过滤膜。营养缺陷型检出

逐个检出法涂布培养基本培养基上不长菌落完全培养基上长出菌落含诱变剂的液体培养基菌种营养缺陷型夹层检出法影印法限量补充培养法（同一培养皿）微量蛋白胨的基本培养基上小菌落是营养缺陷型突变株限量补充培养法是将诱变处理后的细胞接种在含有微量(0.01％以下)蛋白胨的基本培养基上。野生型菌株就会迅速生长成较大的菌落，而营养缺陷型菌株只能形成生长缓慢的微小菌落，因而可以识别检出。如果想得到某一特定缺陷型菌株，则可直接在基本培养基上加入微量的相应物质。①生长谱法方法简便；回变和污染不影响结果测定物质可为粉末或纸片缺陷型的鉴定测定一般应分两阶段：第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；第二阶段：根据第一阶段确定的范围，进一步确定是哪种具体化合物的缺陷型；组合营养物法步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：a.将多种营养因子编组；b.将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；c.结果分析；一组：12345

二组：26789

三组：37101112

四组：48111314

五组：59121415营养因子分组编排时注意；1）每组内无重复的营养因子2）每组中应包含只出现一次的因子3）每组中其他因子应分别出现二次如：营养缺陷型的应用利用营养缺陷型突变株来生产氨基酸和核苷酸是典型的例子天冬氨酸激酶(AK)被赖氨酸及苏氨酸协同反馈所抑制通过诱变处理，获得高丝氨酸缺陷型突变菌株，该突变型不能产生苏氨酸。在限量高丝氨酸的培养基中缺陷型菌株能够正常生长，并且因为消除了反馈抑制突变型能过量生产L-赖氨酸2、杂交育种杂交育种(Hybridization)一般是指人为利用真核微生物的有性生殖或准性生殖，或原核微生物的接合、F因子转导、转导和转化等过程，促使两个具不同遗传性状的菌株发生基因重组，以获得性能优良的生产菌株。有杂交现象的微生物为数不多，在有工业价值的微生物中更少，而且即使发生杂交，遗传重组的频率亦不高，这影响了基因重组在微生物中的应用。3、原生质体融合原生质体融合是通过人工方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体发生融合，并产生重组子的过程，亦可称为“细胞融合”(cellfusion)。原生质体融合技术始于1976年,最早是在动物细胞实验中发展起来的，后来，在酵母菌、霉菌、高等植物、以及细菌和放线菌中也得到了应用。原生质体融合技术示意图主要步骤为：选择亲株；制备原生质体；原生质体融合；原生质体再生；筛选优良性状的融合子。主要试剂：脱壁酶、聚乙二醇(PEG)和Ca2+4、基因工程育种这是一种自觉的、能象工程一样事先设计和控制的育种技术，可以完成超远缘杂交，是必威体育精装版最有前途的育种方法。一个完整的基因克隆过程包括以下步骤１、获得待克隆的DNA片段（基因）；２、目的基因与载体在体外连接；３、重组DNA分子导入宿主细胞；４、筛选、鉴定阳性重组子；５、重组子的扩增与／或表达。*********LOGO情境1淀粉酶的发酵生产任务2：淀粉酶产生菌的改良任务描述微生物体内存在着严密的调控系统，一般不会过量合成某种物质。因此从自然界分离的野生型的菌株合成目标产物的能力通常不高，需要通过基因突变，改变微生物原有的调控。用物理诱变剂（如紫外线、X光等）和化学诱变剂（如亚硝基胍等）处理微生物，可以使微生物的基因发生突变或发生染色体畸变，从而使微生物的遗传特性发生改变，通过平板分离、摇瓶等筛选方法可以筛选出高产、性能优良的菌株。本次任务中，我们将采用紫外线诱变的方法对任务1中得到的菌株进行诱变，并通过平板稀释涂布分离得到单菌落，滴加碘液，根据透明圈观察诱变效果，并与同一稀释度的未诱变菌进行比较，同时比较不同诱变时间的效果。任务目标知识目标：了解常用的物理诱变剂和化学诱变剂；掌握诱变育种的一般方法步骤。能力目标：1