情境2柠檬酸的发酵生产任务2种子扩大培养麸皮固体培养78课.pptVIP

LOGO情境2柠檬酸的发酵生产任务2：种子扩大培养（麸皮固体培养）任务描述在柠檬酸发酵工业上，活化后的斜面菌种需要接入麸皮固体培养基进一步扩大培养，目的是获得大量的孢子以满足种子罐接种的需要。本次任务中，我们将制备麸皮固体培养基，对斜面孢子进行扩大培养。具体任务包括：麸皮固体培养基的制备→灭菌→接种→培养。任务目标知识目标：掌握种子扩大培养的概念和过程；掌握种子质量要求及质量控制。能力目标：1.学会麸皮固体培养基扩大种子培养的方法。素质目标：1．无菌意识2.质量意识任务实施【实施准备】1、仪器设备超净工作台；恒温培养箱；灭菌锅；天平；接种环；500ml三角瓶若干，无菌水、移液管。2、材料菌种：黑曲霉（已活化的斜面菌种）麸曲培养基：取新鲜麸皮，用60目筛子筛去细粉，按麸皮：水=1：(1.0～1.3)比例加水，拌匀至无干粉又无结团，或用水洗麸皮表面，挤去水分至有水感而水不下滴为宜。上述麸皮装入500mL三角瓶中，每瓶装35～40g湿料，塞入8层纱布并包扎好。121℃灭菌30min，趁热摇散，冷却至35℃,培养一天,未发现气味异常或染菌,即可使用。1、制备麸曲培养基并灭菌，移液管及盛蒸馏水的三角瓶也一同放进去灭菌；2、孢子悬浮液的制备：用无菌移液管吸取5mL无菌水至黑曲霉斜面上，用接种环轻轻刮下孢子，装入含有玻璃球的三角瓶中，盖好塞子振荡数分钟。每支斜面的孢子悬浮液可接2~3瓶麸曲三角瓶。3、接种于无菌操作条件下,每一个三角瓶中接入1～2环已活化好的斜面菌种孢子,或2mL斜面菌种的孢子悬浮液,然后摊开纱布、扎好，并在掌心轻轻拍三角瓶，使孢子与培养基充分混合。【实施步骤】4、培养于30～32℃下培养16～20h后,白色小菌落已盖满曲层表面,这时应摇瓶一次,使培养基疏松、铺平,继续培养。再经4～6h,即约培养24h后,可看到培养基结成块状,白色菌丝生长旺盛,但未产生孢子。培养基品温控制在(35±1)℃,以后每隔12～24h摇瓶一次,孢子长出后停止培养。摇瓶时必须充分摇匀,使结块的培养基疏散,铺平后,继续培养。待长出的黑色孢子布满丰盛后,即可使用。一般需培养7～8d。5、麸曲质量要求孢子稠密、整齐、黑亮,无杂色孢子及气生菌丝。每批麸曲任取1～2瓶,进行发酵产酸实验,将麸曲孢子接种于含14%浓度薯干粉的500mL三角瓶中,装液量为40mL,于转速为200r/min的旋转摇床上,35℃下培养24h,下床测定,pH2.0左右,柠檬酸2.0%以上,镜检,菌丝粗壮,成细小菊花状菌球体,无杂菌。【影响三角瓶麸曲质量的因素】1、麸皮质量2、水分3、麸曲培养条件(1)要保持麸曲培养室的温度和湿度,需经常在地上喷洒无菌水,或放一盆(瓶)水使室内相对湿度达60%～70%,室温控制在35℃左右。(2)要保持麸曲培养室内空气新鲜,要经常换气。(3)麸曲培养过程中要及时摇瓶、翻曲、及时扣瓶。LOGO