情境1淀粉酶的发酵生产任务4淀粉酶的后提取62课件.pptVIP

(2)吸附法加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。例如：在枯草芽孢杆菌发酵液中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而可加快过滤速率。(3)变性法加热，大幅度调节pH，加酒精等有机溶剂或表面活性剂等。例如：在抗生素生产中，常将发酵液pH调至偏酸性范围(pH2～3)或较碱性范围(pH8～9)使蛋白质凝固，一般以酸性下除去的蛋白质较多。变性法的局限性：加热法只适合于对热较稳定的目的产物；极端pH也会导致某些目的产物失活，并且要消耗大量酸碱；而有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。*收集胞内产物的细胞或菌体，分离除去液相；收集含生化物质的液相，分离除去固体悬浮物。固液分离的目的：6、固液分离技术*常见的固液分离方法过滤filtration离心Centrifugation膜分离membraneseparation双水相萃取ATPS扩张床吸附EBA*（1）过滤filtration借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。*实验室用抽滤装置*板框压滤机适合于固体含量1-10%的悬浮液的分离。广泛应用于培养基制备的过滤及霉菌、放线菌、酵母菌和细菌等多种发酵液的固液分离。LOGOLOGO*真空转鼓过滤机主体是一个由筛板组成能转动的水平圆筒，表面有一层金属丝网，网上覆盖滤布,圆筒内沿径向被筋板分隔成若干个空间。*结构：转鼓滤饼滤布滤网离心过滤机工作原理图转鼓(上有小孔，亦称悬框)；滤网；滤布；机架。原理：由于离心力作用，液体产生径向压差，通过滤饼、滤网及滤筐而流出。离心过滤机*（2）离心分离基于固体颗粒和周围液体密度存在差异，在离心场中使不同密度的固体颗粒加速沉降的分离过程。动植物细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分离等常用离心分离。*斜角式离心机是一类结构最简单的实验室常用离心机；指离心管腔与转轴成一定倾角的转子。*平抛式离心机平抛式离心机一类结构简单的实验室常用的低中速离心机，转速一般在3000-6000rpm。

*管式离心机管式离心机具有一个细长而高速旋转的转鼓，转鼓内装有纵向平板，其下部有进料口。上部两侧有重液相和轻液相出口。*由机身、传动装置、转鼓、集液盘、进液轴承座组成。GF型：GQ型：用于分离各种浮浊液，进行液-液分离，如油脂；用于分离各种难于分离的悬浮液，进行液-固分离，特别适合于浓度小粘度大，固相颗料细，固液重度差较小的固液分离，如各种药液。*碟片式离心机是生物工业中应用最为广泛的一种离心机有一个密封的转鼓，内装十至上百个锥顶角为60~100゜锥形碟片。碟片间的距离一般为0.5-2.5mm*碟片式离心机工作原理当悬浮液在动压头的作用下，经中心管流入高速旋转的碟片之间的间隙时，便产生了惯性离心力，其中密度较大的固体颗粒在离心力作用下向上层碟片的下表面运动，而后在离心力作用下被向外甩出，沿碟片下表面向转子外围下滑，而液体则由于密度小，在后续液体的推动下沿着碟片的隙道向转子中心流动，然后沿中心轴上升，从套管中排出，达到分离的目的（一）盐析概念：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。盐析是可逆的，而变性是不可逆的早在1859年，中性盐盐析法就被用于从血液中分离蛋白质，随后又在尿蛋白、血浆蛋白等的分离和分级中使用，得到了比较满意的结果。三、蛋白质（酶）沉淀的基本方法***********LOGO情境1淀粉酶的发酵生产任务4：淀粉酶的后提取**任务描述发酵完成后，微生物所产的淀粉酶存在于发酵液中，要先对发酵液进行预处理并过滤，洗涤滤饼合并滤液，适当浓缩后加入硫酸铵或有机溶剂将酶从液体中沉淀出来，然后再进行干燥，粉碎形成产品；或者可以通过微滤固液分离、超滤浓缩、喷雾干燥造粒形成产品。本次任务中，我们主要采用盐析法沉淀出淀粉酶，即往预处理过的发酵液中加入适量硫酸铵，大量硫酸铵的存在会破坏淀粉酶的水化层，同时中和酶的表面电荷，使酶快速的形成沉淀，得到分离纯化。**任务目标知识目标：1、了解发酵液的预处理及盐析的原理；2、了解酶制剂的后提取工艺。能力目标：1、掌握发酵液预处理的方法；2、掌握盐析的操作方法。素质目标：1