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邻二氮菲分光光度法
测定微量铁
一、实验目的
学习分光光度计结构及工作原理及使用方法；
掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理及方法；
理解吸收曲线的制作方法；
掌握标准系列的配制及标准曲线的制作方法。
二、实验原理
（显色剂）（橙红色）
1,10-邻二氮杂菲1,10-邻二氮杂菲亚铁
二、实验原理
吸收光谱曲线：简称吸收曲线，测定待测物质在不同波长下的吸光度，以波长（nm）为横坐标，以吸光度A为纵坐标所描绘的曲线。
二、实验原理
测定依据：朗伯-比尔定律
分光光度法的定量依据。当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度及光程（溶液的厚度）成正比关系。
标准曲线法
标准曲线
（A=Kc）
二、实验原理
配制一系列浓度不同的标准溶液，测定吸光度值
以不含有被测组分的空白溶液作为参比
以标准溶液的浓度（c）为横坐标，以相应的吸光度（A）为纵坐标，绘制A-c标准曲线
如果符合Beer定律，理论上可以得到一条通多原点的直线，得到吸光度与浓度的线性关系
此处K值是一个在具体条件下的比例常数。
三、仪器及试剂
1、试剂
①铁标准储备液200.0μg/mL
准确称取1.7268g优级纯的铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O于小烧杯中，加水溶解，加入3mol/LH2SO4溶液20mL，转移到1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
②盐酸羟胺溶液（用时配制）100g/L
三、仪器及试剂
1、试剂
③邻二氮菲（又称邻菲罗啉）溶液1.5g/L
称取0.75g邻二氮菲于小烧杯中，加入2～3mL95%乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到500mL。避光保存，两周内有效。
④NaAc溶液1.0mol/L
称取41g分析纯醋酸钠，加水溶解后，稀释至500mL。
⑤未知液（浓度约为20～30ug/mL）
2、仪器
紫外-可见分光光度计、石英吸收池。
四、实验步骤
（1）准备工作
打开仪器电源开关，预热。
（2）标准溶液的稀释：20.00μg/mL铁标准溶液
移取200.0μg/mL铁储备液10.00mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。即得20.00μg/mL铁标准溶液。
四、实验步骤
（2）标准系列溶液的配制
在6支50mL比色管中，分别加入20.00μg/mL铁标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL，再加入1mL100g/L盐酸羟胺溶液，摇匀后再分别加入2mL1.5g/L邻二氮菲溶液和5mLNaAc溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
问：一系列浓度不同的标准溶液的浓度各是多少？
四、实验步骤
（3）吸收曲线的绘制和测量波长的选择
选取6.00mL的标准溶液，以试剂空白为参比，用1cm比色皿，在400-600nm每隔1nm测量一次吸光值并记录下来。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，并选择最大吸收波长作为测定波长。
（4）标准曲线的测定
上述一系列不同浓度的标准溶液，在最大吸收波长处，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，测吸光度A并记录。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线。
四、实验步骤
（5）样品测定
准确移取5.00mL铁未知液，在50mL比色管中，按照步骤（2）显色，于最大吸收波长处测定吸光度A并记录。由标准曲线的线性方程计算出未知液中铁的浓度。
平行测三份。
五、数据记录
1.吸收曲线的绘制和测量波长的选择
结论：λmax=______nm
五、数据记录
2.标准曲线的绘制
项目
参比
溶液
标准溶液
序号
0
1
2
3
4
5
铁标准溶液浓度(ug/mL)
20.00
V(mL)
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
定容后V(mL)
50.00
50.00
50.00
50.00
50.00
50.00
cFe(ug/mL)
0.00
A
0.000
线性回归方程
相关系数
五、数据记录
3.未知液的测定
项目
样1
样2
样3
V未知(mL)
定容后V(mL)
50.00
50.00
50.00
吸光度(A样)
从标准曲线中查得未知稀释液中铁的浓度（ug/mL）
稀释倍数
未知液中铁的含量（ug/mL）
未知液中铁的含量平均值（ug/mL）
相对极差(%)
六、数据处理
1、未知液中铁浓度cx1、cx2、cx3的计算：
由标准曲线线性方程计算得出。
2
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