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鸡传染性支气管炎病毒的分离、鉴定和鉴定 鸡感染综合征（ib）是由感染支气管炎病毒（ibv）引起的急性和高度接触性感染。该病毒在复制过程中极易发生变异, 从而导致IBV血清型众多, 新的变异株不断出现。病毒对组织器官亲嗜性也在发生变化, 导致不同病变型的出现。目前除呼吸型、肾型、肠型外, 1995年以来我国在江苏、山东、山西、安徽等地发现以生长阻滞、消瘦、腹泻, 剖检表现为腺胃肿胀、乳头出血和溃疡, 胸腺、法氏囊萎缩为特征的腺胃病变型鸡传染性支气管炎。并呈现流行趋势, 给养鸡业造成重大经济损失。 1 鸡体内agv毒株的分离及鉴定 王永坤 (1996) 、王玉东 (1997) 等先后从发病鸡腺胃中分离到了冠状病毒。该病毒形态为有囊膜的、多形态、略呈球形或梨形, 直径为80~160 nm, 囊膜表面覆有长12~25 nm的突起, 整个病毒呈皇冠状。鸡胚盲传5~6代 时出现严重胚体卷缩。该病毒TOCLD50的平均值为10-5.91以上, 最高可达10-6.36。理化特性与呼吸型传支和肾型传支相似, 对热、酸、碱和胰蛋白酶均有一定的耐受力, 二价镁离子能明显提高其耐热性;对脂溶剂敏感, 符合IBV具有囊膜这一特征 。 朱国强等从江苏省发病地区鸡腺胃中分离的H95毒株具有典型的冠状病毒状态, 大小为60~180 nm, 并成功地研制出抗H95毒株膜蛋白的单克隆抗体。H95提纯样品经SDS和Western blotting试验证明H95株单抗DE7和M41株单抗6DH8均能识别H95株蛋白多肽, 说明H95株病毒多肽结构与IBV非常相似, 间接ELISA和血凝抑制试验结果证实了H95毒株与多株IBV标准株和分离株的多抗血清和单抗发生交叉反应, 同时H95毒株的多抗血清和单抗也能识别多株IBV毒株, 结果表明分离的四株流行株与传染性支气管炎病毒 (IBV) 有密切的血清学关系。 王碧林等以腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株H95提取的RNA为模板, 按IBV Beaudette株S1基因两侧对应序列, 设计一对27bp引物、引物间跨幅为1.7kb。用反转录—聚合酶链反应 (RT-PCR) 获得与预期大小一致的核酸片段, RT-PCR产物凝胶电泳后, Southern印迹, 经IBV M41型S1探针检测呈阳性, 表明获得的分离株H95S1基因与IBV M41的S1基因有同源性, 从核酸水平说明以腺胃病变为特征的分离毒H95为传染性支气管炎新出现的变异株。 荣骏弓等用病鸡腺胃组织 (D971) 接种SPF鸡胚, 传至13代, 具有规律性死亡和典型胚胎病变特征, ELD50为10-6.48/0.2 mL。用D971毒株接种SPF鸡, 能引起与自然病例相似的病理变化, 并分离到病毒。D971毒株经卵磷脂酶C处理后能凝集鸡红细胞, 并能特异的被D971多抗抑制。用反转录聚合酶联反应获得了D971株免原 (S1) 基因cDNA, 经1%琼脂糖凝胶电泳可见1.7kb的特征性条带, 证实从腺胃病变型IB鸡群中分离的D971毒株是冠状病毒科IBV成员。用D971株接种1日龄SPF鸡, 连续传10代后, 培育出了腺胃病变型鸡传染性支气管炎强毒株IBV?D971J株。IBV?D971J10对SPF鸡胚的致病力为10-6.45ELD50/0.2 mL, 对1日龄SPF鸡的致病力为10-1.5LD50/mL。从哈尔滨市某鸡场分离到的IBV-Hu98毒株感染SPF鸡的临床症状和病理学、组织学变化与D971株基本相似, 经部分理化特性测定, 证实IBV-Hu98株符合IBV特性。 张小飞等从安徽省某鸡场患有呼吸道症状和腺胃病变的病鸡中分离到一株病毒 (HN) , 经电镜观察、人工发病试验及血清学试验初步鉴定为腺胃型传染性支气管炎病毒。该毒株在鸡胚中能稳定传代并具有规律性死亡和典型胚胎病变特征。对热、乙醚和氯仿敏感, 耐酸 (pH3.0) , 耐碱 (pH11.0) , 能抵抗1%胰蛋白酶, 能在鸡胚中干扰鸡新城疫病毒LaSata株的增殖, 试验结果表明, HN毒株的理化特性与鸡传染性支气管炎病毒相符。 周继勇等对浙江分离毒株 (ZJ971株) 的结构蛋白进行了SDS电泳和S1基因的克隆及序列分析, 发现IBV-ZJ971株不同于已有各血清型IBV最明显的特征是:缺损116000的蛋白条带;S1基因序列125、182、277位上的碱基被置换;缺失FokI、BbVI、pflm I、Fnu4H 14个核酸内切酶位点;S1蛋白多肽链41、59、91、141位点上的氨基酸被置换。 潘杰彦对IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/02, 原称QXIBV) RNA进行了RT-PCR扩增, 产物经琼脂糖凝胶电泳分析, 呈现1条1657bp的条带, 将其克隆入pMD18-T载体中, 并进