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hplc同时测定椭圆叶花锚中4种酮成分的含量 “蒂达”（练习“汉其陈”）是藏医学临床治疗肝胆等疾病的重要药物。根据文献记载和作者的实地调查，其基本原非常复杂。它包括10多个属于龙胆科、虎耳草科、石竹科、嘴唇科、芹菜科和罂粟科的疾病。通过《中国药典》等相关标准，获得的基地原及其基准参数和试验构成不一致。为保证“蒂达”的用药准确、安全有效,必须对其进行品种整理及质量标准的完善。龙胆科植物椭圆叶花锚Halenia ellipticaD.Don系“蒂达”的主要原植物之一,《卫生部药品标准·藏药(第1册)》和《藏药标准》中以“花锚/甲地然果”之名收载,但均仅规定有性状和显微鉴别。本品以干燥地上部分入药,味苦、性寒,具清热利湿、平肝利胆之功效,用于治疗急性黄疸性肝炎、胆囊炎、头晕头痛、牙痛等症。目前已有使用椭圆叶花锚作为“蒂达”配伍的藏成药上市。文献报道,椭圆叶花锚含有酮及其苷、裂环烯醚萜类、三萜类及黄酮苷等成分,其中酮类成分具有保肝、血管舒张、抗氧化及免疫调节等广泛的生物活性。而据实地调查,目前使用本种配伍的藏成药中多以齐墩果酸为含量控制指标成分,显然其专属性和客观性不足。为建立和完善来源于椭圆叶花锚的“蒂达”药材的质量标准,本研究建立了采用HPLC法同时测定椭圆叶花锚中4个酮类成分含量的方法,并根据对30批样品的含量测定结果分析,提出了椭圆叶花锚的成分含量限度建议。 1 样品和对照品 高效液相色谱仪(戴安P680HPLC;检测器戴安ASI-100ASI;Chromeleon工作站;Waters 2695-2996 高效液相色谱;Empower pro工作站);电子天平(Sartoris BS 224S;岛津AUW220D);纯水机(Millipore美国)。 椭圆叶花锚样品共30份,其中1～3号收集自企业或市场,其他均为自采对口药材(表2),经重庆市中药研究院钟国跃研究员和刘翔助理研究员鉴定,为椭圆叶花锚H.elliptica(1～29号)及其变种大花花锚H.ellipticavar.grandiflora30号)。各样品经50℃烘至恒重后粉碎成均匀粉末(中粉,过4号筛)。 对照品1-羟基-2,3,4,7-四甲氧基酮(1)、1-羟基-2,3,7-三甲氧基酮(2)、1-羟基-2,3,4,5-四甲氧基酮(3)、1-羟基-2,3,5-三甲氧基酮(4)均为自制(经核磁共振波谱鉴定),经HPLC面积归一化法标定各对照品纯度分别为97.7%,98.5%,98.5%,98.0%;乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 有关2022 nm,流速1.2 mL·min-1,柱温40 ℃;进样量10 μL。在上述色谱条件下,1～4色谱峰与相邻色谱峰分离度大于1.5,理论塔板数均大于5 000,见图1。 2.2 对照品的制备 精密称取1～4对照品适量,加甲醇分别制成每1 mL含1～4对照品各16.58,69.564,117.84,120.48 μg的标准溶液。 2.3 甲醇溶液的制备 取椭圆叶花锚粉末约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入90%甲醇溶液各50 mL,再精密加入盐酸0.15 mL,称重, 80 ℃水浴回流30 min,放冷,再称重,加甲醇补足失重,摇匀,滤过,即得。 2.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品母液5,2.5,1.25,0.5,0.25 mL至10 mL量瓶中,甲醇定容至刻度。精密吸取上述对照品母液和上述对照品溶液20 μL,按上述色谱条件测定。以对照品质量浓度X(μg)为横坐标,峰面积Y为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程。结果表明1～4分别在0.414～16.580,1.73～69.564,5.892～117.84,3.012～120.48 mg·L-1呈良好的线性关系。回归方程分别为Y=1.157 2X+0.001 2,r=0.999 9(1);Y=1.335X-0.552 9,r=0.999 9(2);Y=1.008 8X-0.27,r=0.999 9(3);Y=0.810 7X-0.534 7,r=0.999 9(4)。 2.5 进样精密度试验 精密吸取2.2项下混合对照品溶液,按2.1色谱条件重复进样6次,每次5 μL,记录4种对照品的峰面积,1～4 RSD分别为1.4%,1.3%,1.2%,1.2%,表明精密度良好。 2.6 含量测定 取同一批号样品6份,按2.3项下方法制备供试品溶液,同法测定,计算各成分含量,结果1～4的RSD分别为1.5%,1.3%,1.7%,1.0%。 2.7 rsd测定 取同一供试品溶液,分别于0,1,2,4,8 h精密进样10 μL,记录峰面积,1～4 RSD分别为1.7%,1.5%,1.4%,0.4%。 2.8 加样回收率试验 取已知含量的