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木豆叶药材的质量评价 木豆是蔷薇科植物，分布于东南亚、印度、中国西南部和海南。民间将木豆嫩叶用于止血、止痛、抗感染, 并用于治疗褥疮、水痘和股骨头坏死等疾病。木豆叶除较早发现的有效成分牡荆苷外, 近年文献报道了木豆叶中的茋类化合物能降低高脂小鼠血清和肝脏脂质水平, 对雌激素缺乏导致的大鼠骨质丢失具有改善作用。木豆叶药材的现行质量标准收载于《广东省中药材标准》2004年版, 但标准中无定量测定项。为进一步提高药材的质量控制水平, 本研究对海南产木豆叶进行了检测, 对药材进行了性状、显微特征和TLC鉴别, 以及有效成分定量等项目研究, 为海南省中药材地方标准的出台提供参考依据。 1 超纯水器、色谱-质谱仪、水 ZF-1型三用紫外分析仪, Waters 515液相色谱系统 (Waters 515泵;2996PDA检测器) , 美国Pall公司Cascade Ⅸ超纯水器, 日本Kubota公司KR—702型离心机。牡荆苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号111687-200501) , 异美五针松双氢黄酮、木豆茋由暨南大学药学院提供 (质量分数大于99%) 。乙醇、磷酸为分析纯, 乙腈为色谱纯, 水为超纯水。木豆叶采于海南省万宁市兴隆华侨农场, 由中国医学科学院兴隆分所陈伟平教授鉴定为豆科木豆属植物木豆Cajanus cajanL.。 2 方法和结果 2.1 下灰灰绿色病叶片 三出复叶, 互生;卷缩或半卷缩, 完整叶片展开后呈卵状披针形, 长5~10 cm, 宽1~3.5 cm;托叶小;叶柄长约2 cm, 向上渐短;叶片先端锐尖, 全缘, 上表面绿色或棕褐色;下表面绿褐色。两面均被白毛, 下面具有不明显腺点。 2.2 神经组织结构 横切面, 上下表面细胞类长方形, 外被角质层;下表皮具稍凸起的气孔。非腺毛下表皮较上表皮多, 由1~2个细胞组成, 上部尖;腺毛偶见, 腺头细胞一个, 较大, 腺柄细胞一个。栅栏组织为1例细胞, 偶见两列;海绵组织疏松。主脉维管束外韧型, 中柱鞘纤维断续成环, 壁木化, 周围细胞含草酸钙方晶, 形成晶纤维。主脉上表皮内侧有数列厚角细胞;薄壁细胞含草酸钙方晶。 2.3 对照品溶液的制备 取木豆叶粉末0.5 g置250 mL圆底烧瓶中, 加70%乙醇50 mL, 回流提取20 min, 放凉, 滤过, 滤液蒸干, 用25 mL甲醇溶解, 得供试品溶液。另取木豆茋、异美五针松双氢黄酮、牡荆苷对照品加甲醇分别配制成质量浓度分别为0.034、0.61、0.35 mg/mL的溶液, 作为对照品溶液。照薄层色谱法 (《中国药典》2005年版一部附录ⅥB) 试验, 分别吸取异美五针松双氢黄酮、牡荆苷对照品溶液各10 μL, 木豆茋对照品溶液和供试品溶液各20 μL, 分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上, 以甲苯-丙酮-甲醇 (6∶2∶2) , 加两滴醋酸为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 365 nm紫外灯下观察, 供试品与对照品在相同位置有相同的荧光斑点, 见图1。 2.4 测量的测量 2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取牡荆苷对照品3.0 mg、异美五针松双氢黄酮6.1 mg、木豆茋3.4 mg, 分别置10 mL量瓶中, 甲醇溶解、定容, 作为对照品储备液冷藏保存。依次取上述3种对照品溶液 1、2、3 mL置10 mL量瓶中混合, 甲醇定容至刻度, 摇匀得混合对照品溶液。临用前以0.45 μm微孔滤膜过滤。 2.4.2 %乙醇的提取 精密称取常温减压干燥至恒重的木豆叶细粉0.5 g, 置具塞锥形瓶中, 精密加入70%乙醇50 mL, 称定质量, 沸水浴回流提取20 min, 放冷, 再称定质量, 用70%乙醇补足减失的质量, 摇匀, 静置, 吸取上清液, 经0.45 μm微孔滤膜滤过, 取续滤液, 即得。 2.4.3 组分分离度为5.2%a5 XTerra C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) ;流动相:0.2%磷酸水溶液 (A) -乙腈 (B) , 梯度洗脱 (0~15 min, 83% A;15~20 min, 83% A~45% A;20~30 min, 45% A; 30~35 min, 45% A~30% A;35~45 min, 30% (A) ;体积流量:1.0 mL/min;最大吸收波长牡荆苷为338 nm, 理论塔板数6 000以上;异美五针松双氢黄酮为300 nm, 理论塔板数10 000以上;木豆茋为261 nm, 理论塔板数10 000以上;在以上3个波长下对应的被测组分分离度均在1.5以上, 拖尾因子均小于1.10, 柱温40 ℃。色谱图见图2。 2.4.4 农业保险的回归方程 分别精密吸取混合对照品溶液4、6、8、10、12、14、16 μL