DB35T 1761-2018蜜蜂黑蜂王台病诊断技术.docxVIP

ICS 65.140 B 47 福 建 省 地 DB35 方 标 准 DB35/T 1761—2018 蜜蜂黑蜂王台病诊断技术 Diagnostic techniques for Black Queen Cell Disease of Honey Bees 2018 - 04 - 03 发布 2018 - 07 - 03 实施 福建省质量技术监督局 发 布 I DB35/T 1761—2018 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 缩略语 1 5 疾病概述 2 6 临床诊断 2 7 实验室诊断 2 8 综合判定 5 附录 A(规范性附录) 溶液的配制 7 附录 B(资料性附录) 溶液的配制 8 附录 C(资料性附录) 核酸扩增电泳图 9 II DB35/T 1761—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由福建出入境检验检疫局提出并归口。 本标准起草单位：福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心、福建农林大学、吉林出入境检验检疫 局、厦门瑞德利校准检测技术有限公司。 本标准主要起草人：张体银、郑腾、王武军、黄少康、宋战昀、张永东、张志灯、白泉阳、林杰、 于师宇。 1 DB35/T 1761—2018 蜜蜂黑蜂王台病诊断技术 1 范围 本标准规定了蜜蜂黑蜂王台病临床诊断、实验室诊断和综合判定。 本标准适用于蜜蜂黑蜂王台病的诊断和蜜蜂黑蜂王台病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 王台 queen cell 候选蜂王的寝宫，即工蜂为培育蜂王所筑成的巢房。 注： 王台亦名“母蜂房”。 3.2 黑蜂王台病 black queen cell disease 由蜜蜂黑蜂王台病毒(Black queen cell virus)引起的蜂王幼虫及蛹感染，并可导致巢房变黑， 进而引发蜜蜂大量死亡的一种严重的蜜蜂病毒病。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BQCV：黑蜂王台病毒(Black queen cell virus) Ct：循环阈值(Cycle threshold) DEPC：焦碳酸二乙酯(Diethy pyrocarbonate) dNTP：三磷酸脱氧核苷酸(Deoxynucleoside triphosphate) EB：溴化乙锭(Ethidium bromide) RNA：核糖核酸(Ribonucleic acid) RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction) TBE：三羟甲基氨基甲烷-硼酸- 乙二胺四乙酸(Trihydroxymethyl aminomethane-boric acid- ethylene diamine tetraacetic acid ) 2 DB35/T 1761—2018 5 疾病概述 蜜蜂黑蜂王台病(Black queen cell disease)是由黑蜂王台病毒(Black queen cell virus，BQCV) 引起的一种常见的蜜蜂病毒病， 春季和初夏高发， 主要危害蜂王的幼虫和蛹， 并可导致巢房变黑， 进而 引发蜜蜂大量死亡，目前已呈全球性分布。 6 临床诊断 6.1 临床症状 6.1.1 患病蜂王幼虫体色变黄，表皮逐渐硬化呈囊状。 6.1.2 患病蜂蛹体色变暗，快速死亡。 6.1.3 患病蜂王体色先变为灰白色，逐渐再变为黑色，最后王台内壁变成棕色或黑色。 6.1.4 成年蜜蜂主要有尾部变黑，体毛脱落、斑纹混乱、蜜蜂吻拉长，严重时无法飞行而只能爬行移 动。 6.2 初步诊断 当蜂群出现以上部分或全部临床症状时，可做出初步诊断，确认需要进行实验室诊断。 7 实验室诊断 7.1 设备、材料和试剂 7.1.1 设备 7.1.1.1 7.1.1.2 7.1.1.3 7.1.1.4 7.1.1.5 7.1.1.6 7.1.1.7 7.1.1.8 普通 PCR 扩增仪。 荧光 PCR 仪。 台式冷冻高速离心机。 微量移液器(0.5 μL~10 μL, 2 μL~20 μL, 20 μL~200 μL, 100 μL~1000 μL)。 水平电泳仪。 凝胶成像系统。 电